RNA降解终结者！新鲜组织保存剂，锁住RNA完整性

背景: RNA作为单链核酸分子，极易被环境中的RNA酶（RNase）降解。RNA酶广泛存在且难以彻底灭活，传统方法如液氮速冻或超低温保存虽有效，但存在操作复杂、成本高昂、不便运输等局限性。随着分子生物学技术（如qPCR、RNA-seq）的普及，对高质量RNA的需求激增。传统保存方法难以满足大规模、多场景的样本处理需求，尤其是在临床、野外等不具备超低温条件的场景下。化学合成与生物技术的进步催生了新型RNA保存剂。这些保存剂通过抑制RNase活性、稳定RNA结构，传统方法如液氮速冻需要专业设备和即时处理，而RNA保存剂允许样本在采集后直接浸入保存液，无需立即处理，显著提高了实验的灵活性和效率。 实现了在常温或低温条件下的长期保存，填补了传统方法的空白。^[1]

适用场景：

1.  核酸酶（如 RNase/DNase）活性高的组织样本；2.  无法立即进行核酸提取，且缺乏液氮或深低温冷冻设备的保存需求；

 3. 样品需在室温或仅使用冰袋的条件下进行长途运输。^[2]

操作步骤:

保存新鲜组织样品

1.原组织体积5-10倍的标准，估算使样品完全浸没所需的RNA保存液体积,随后标记收集管，并加入该估算体积的保存液。

2.为达到最佳保存效果，样品应被快速剪碎（厚度 < 0.5 cm）后放入保存液。例外情况：鼠类的小型器官（如肝、肾、脾）以及未覆盖蜡质保护层的植物组织，无需剪切即可直接保存；含蜡质表皮的植物样品，则需预先破坏其蜡层

蜡质植物叶片

3.组织碎块完全浸没于收集管里的RNA保存液中 

4.将收集管存放于适当条件下，确保不超过该温度下的最长允许存放时间。保存时先将样本在4°C冰箱浸入RNA保存液中过夜（使保存液充分渗透组织、置换水分并抑制RNase活性）。

-后续保存于-20°C或-80°C可长期有效。

-经RNA保存液处理的样本，可耐受一次冻融循环（至室温）而不影响RNA质量 

5.RNA提取样本前处理：

5.1. 解冻：从 -20°C/-80°C 取出样本，室温平衡。

5.2. 分类型处理：

组织：直接取组织块，按新鲜组织流程提取（室温匀浆，无需液氮）。

细胞：低速离心收集沉淀，移除大部分保存液（允许微量残留），按细胞流程提取。

5.3. 时效性：处理后立即提取或后续操作。^[2][3]

RNA 保存液使用注意事项

1. 沉淀处理：保存液如出现沉淀，请置于 37℃加热振荡混匀，待沉淀完全溶解后再使用。

2. 组织处理要求：要保存的组织样本，其任何一边的最大厚度都不能超过 0.5 cm。 若组织过厚（>0.5 cm），必须切碎，确保所有碎片厚度均< 0.5 cm，否则会因保存液渗入过慢导致 RNA 降解。  植物叶片样本：需破坏叶片表面的蜡质表皮（如轻轻刮擦），否则保存液难以有效渗入。

3. 样本浸润与保存： 将处理好的组织块或细胞沉淀立即浸没于 5-10 倍体积的 RNA 保存液中（取材速度要快，防止降解）。切勿立即冷冻! 加入保存液后，样本必须先于 4℃ 置放过夜，确保组织充分浸润。

4. 运输要求:保存于 RNA 保存液中的组织样品如需长途运输，必须确保组织始终完全浸没在保存液中。

5.  安全操作：应穿戴实验服和一次性手套来进行操作^[4]

RNA保存液的配方:成分及原理分析

以下为是市面上常见的五种试剂成分表

试剂成分表1

RNA保存液由以下组分制成：0 .5～2M异硫氰酸胍、5～20mM乙二胺四乙酸、20～500mM Tris缓冲剂、0 .25～ 0 .5M氯化钾、0 1～3wt％改性壳聚糖、异丙醇5～ 10vol％、余量为DEPC水^[5]

试剂成分表2

0 .5-1份 的氯化钠、2-3份的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、1 .5-5份螯合剂、5-10份RNase抑制剂、6-11份表面活性剂、1-5份防腐剂、65-84份水^[6]

试剂成分表3

蛋白变性剂:异硫氰酸胍和氯化锂（LiCl）;还原剂:1%的β－巯基乙醇;螯合剂:EDTA;表面活性剂:表面活性剂包括阴离子表面活性剂、非离子表面活性剂、阳离子表面活性剂或两性表面活性剂中的一种或多种，例如Tween20、SDS、Triton^[7]

试剂成分表4

二硫苏糖醇：2mM-10mM；柠檬酸盐：1mM-3mM；硫酸铵:10-19mM；黄原酸酯：0 .1-0.6g/L^[8]

试剂成分表5

焦碳酸二乙酯、单甲氧基聚乙二醇-二硫-二维生素E琥珀酸酯和RNA酶抑制剂(甘氨酸或 RNasin)、铵盐为氯化铵、缓冲剂为三羟甲基氨基甲烷^[9]

具体成分的作用机制

公司介绍

参考文献:

[1]RNA长效保存液https://www.chemicalbook.com/NewsInfo_7220.htm

[2]无液氮RNA/DNA样品储存https://wenku.baidu.com/view/1cfe74292af90242a895e5f0

 [3]RNA保存液 http://wenku.baidu.com/view/edb648fca45177232e60a236?from_appshare=readpage

[4]RNAwait (非冻型组织RNA保存液) http://wenku.baidu.com/view/5773a37158cfa1c7aa00b52acfc789eb172d9e1d?from_appshare=readpage

[5]RNA保存液的专利 1CN117904257A

[6]RNA保存液 2CN117265070A

[7]RNA保存液 3CN116790577B

[8]RNA保存液4 000000_20230725_0A_CN_0

[9]RNA保存液5CN 116200455 A