PAGE凝胶贮存液 – 聚丙烯酰胺凝胶电泳制胶液

PAGE凝胶贮存液 – 聚丙烯酰胺凝胶电泳制胶液

产品用途

PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）是分子生物学中核酸片段高分辨率分离的核心技术。本产品提供基于30% Acrylamide（29:1） 和 5×TBE缓冲液 的PAGE凝胶配制方案，通过调整凝胶浓度（3.5%～20%），可实现对不同长度DNA/RNA片段的高效分离。PAGE凝胶的分辨率远高于琼脂糖凝胶，可区分仅1～2个碱基差异的核酸片段，广泛用于DNA测序、微卫星分析（SSR）、单链构象多态性分析（SSCP）、核酸探针制备检测、PCR产物精确定量、引物分析等实验。

PAGE凝胶浓度选择指南

选择原则：

• 小片段核酸（<500 bp）选 12%–20% 凝胶

• 大片段核酸（>10 kb）选 3.5%–5% 凝胶

• 介于两者之间按片段大小线性选择中间浓度

核心组分

• 30% Acrylamide（29:1） – 单体/交联剂储备液

• 5×TBE 缓冲液 – Tris-硼酸-EDTA电泳缓冲液

• 10% 过硫酸铵（APS） – 自由基引发剂

• TEMED（四甲基乙二胺） – 聚合催化剂

配制方法（通用流程）

第一步：配制凝胶混合液

1. 根据目标胶浓度，按配方量表精准量取以下组分，置于洁净烧杯中：

• H₂O

• 30% Acrylamide（29:1）

• 5×TBE

2. 低速混匀，避免产生气泡。

第二步：启动聚合反应

1. 加入对应体积的 10% APS，快速混匀。

2. 临灌胶前加入 TEMED，立即轻轻颠倒混匀（聚合反应即刻启动，需快速操作）。

第三步：灌胶与聚合

1. 将混合液缓慢注入电泳胶板间隙，避免气泡产生。

2. 插入梳子。

3. 室温（25℃）静置 30–60 min 至完全聚合。

第四步：凝胶处理

1. 聚合完成后小心拔梳。

2. 用 1×TBE 冲洗加样孔，去除未聚合残留物。

3. 凝胶即配即用，或短暂保存于1×TBE缓冲液中（建议立即使用）。

各组分功能详解

关键操作要点

• 丙烯酰胺神经毒性防护（最重要）：丙烯酰胺为强神经毒性物质，操作全程必须佩戴手套、口罩、护目镜，避免皮肤接触或吸入粉尘。聚合后毒性降低（但凝胶中可能含少量未聚合单体），仍需规范操作。

• APS现配现用（重要）：10% APS需现配现用（或4℃保存≤1周），APS失效会导致凝胶聚合失败。若发现溶液颜色变黄，说明已降解。

• TEMED密封避光保存：TEMED开封后需密封4℃避光保存，避免挥发和光降解。TEMED挥发后浓度下降，聚合速度会显著减慢。

• 温度对聚合的影响（重要）：

• 室温<20℃：可适当增加APS/TEMED用量，加速聚合。

• 室温>30℃：适当减少APS/TEMED用量，防止聚合过快导致凝胶开裂或聚合不均匀。

• 去除气泡：灌胶时混合液应缓慢注入，避免引入气泡（气泡会导致凝胶孔道不均，影响电泳条带质量）。

• 即配即用：PAGE凝胶建议立即使用，不宜长时间保存（保存后凝胶易脱水、pH漂移或聚合质量下降）。

常见问题排查

相关推荐

• 30% Acrylamide（29:1） – PAGE凝胶核心原料

• 5×TBE缓冲液 – PAGE电泳运行缓冲液

• 10% APS – 聚合引发剂

• TEMED – 聚合催化剂

• PAGE电泳仪 – 垂直电泳装置

• DNA分子量标准（Marker） – 电泳片段大小参照

• Loading Buffer（6×） – 核酸上样缓冲液（含溴酚蓝、二甲苯青）

• 银染试剂盒 / EB染色液 – PAGE凝胶染色检测