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好不容易取到的新鲜组织,RNA说降解就降解?这份保存液配方请收好

发布时间:2026-07-16      点击次数:5


好不容易取到的新鲜组织,RNA说降解就降解?这份保存液配方请收好

做过组织RNA实验的人都有过这种经历:好不容易从小鼠身上取到肝脏、脑或肿瘤组织,液氮还没准备好,RNA酶已经开始“动手”了——你甚至能感受到RNA在指尖一点点消失。液氮保存?需要专门容器和防护,野外采样根本没法操作;-80℃冰箱?样本运输途中怎么办;直接放普通冰箱?RNA第二天就降解得差不多了。传统方法要么太麻烦,要么不靠谱,那有没有一种办法,能让新鲜组织里的RNA“乖乖待着别动”?

一、新鲜组织RNA保存剂是什么?

新鲜组织RNA保存剂是一种水相、无毒的组织储存液体,核心功能就四个字:抑、渗、稳、护——抑制RNase活性、渗入组织细胞内部、稳定RNA分子结构、保护核酸不被降解。将新鲜组织切块后直接浸入保存液中,试剂会迅速渗透到组织内部,原位“定格”细胞内的RNA状态。整个过程从“取样→液氮速冻→-80℃转运”简化为“取样→浸泡保存液→任意温度运输”,再也不用追着液氮罐跑了。

市面上RNA保存液的配方虽有差异,但核心功能模块基本一致。下表整理了常见配方成分及其作用[2][3]:

成分类别

常见原料

核心作用

参考浓度

离液盐/蛋白变性剂

硫酸铵

高浓度盐破坏蛋白水化层,使RNase变性失活

400-500g/L(约3-4M)

螯合剂

EDTA(乙二胺四乙酸)

螯合Mg²⁺、Zn²⁺等金属离子——这些是RNase发挥活性必需的辅因子,去除后RNase“巧妇难为无米之炊”

15-25mM

缓冲/保护剂

柠檬酸钠

维持酸性pH环境(RNase在酸性条件下活性极低),同时柠檬酸根可辅助螯合金属离子

15-25mM

还原剂(可选)

DTT(二硫苏糖醇)

打断蛋白二硫键,辅助RNase彻底失活

10-20mM

溶剂

无酶无菌水、DEPC处理水

作为载体,保证各组分均匀分散

余量

配比仅供参考,不同配方体系间存在差异。另有异硫氰酸胍体系(如4-5M)为强烈变性路线,更适用于RNA提取裂解液,但该体系在酸性条件下易析出沉淀,不适用于本配方的保存场景。

二、配制步骤(以经典的硫酸铵-柠檬酸钠体系为例)[2]

本配方以配制1L保存液为例,需准备以下原料:

l EDTA二钠盐(Na₂EDTA·2H₂O):约7.4g(终浓度20mM)

l 柠檬酸三钠二水合物:约7.4g(终浓度25mM)

l 硫酸铵:400-500g(终浓度约3-4M)

l 酶无菌水(DEPC处理水或商品化无酶水)定容至1L

l 1M柠檬酸溶液(用于调节pH)

配制步骤:

1. 配制EDTA溶液:称取约7.4g EDTA二钠盐,溶于200mL无酶水中,用NaOH调节pH至8.0帮助溶解(EDTA在碱性条件下更易溶)。

2. 配制柠檬酸钠溶液:称取约7.4g柠檬酸三钠二水合物,溶于50mL无酶水中,搅拌至完全溶解。

3. 混合主成分:将上述两种溶液混合,加入400-500g硫酸铵粉末。

促溶:将混合液置于磁力搅拌器上,室温长时间搅拌(建议过夜)至硫酸铵完全溶解。若需加速,可低加热至不超过37℃,但溶解后必须完全冷却至室温后再进行下一步。

4. 定容与调pH:加无酶无菌水定容至1L。冷却至室温后,用1M柠檬酸溶液缓慢调节pH至5.2。柠檬酸为弱酸,滴定曲线平缓不易过调,且柠檬酸根本身具有螯合辅助作用。

5. 过滤除菌:用0.45μm或0.22μm滤膜过滤除菌(建议使用PES或PVDF材质滤膜),分装至无菌离心管中,室温或4℃保存。

关键提醒:

l 硫酸铵完全溶解是关键步骤,400-500g/L在常温下仍属高浓度,需要耐心搅拌(室温下可能需数小时甚至过夜)。

l 所有器具和溶剂必须无核酸酶(使用DEPC处理水或商品化无酶水)。

l pH必须精确控制在5.2左右——pH过高RNase抑制效果大打折扣,pH过低可能损伤组织。

l 配制全程在洁净区操作,避免外源RNase污染。

l 组织浸泡时需切成0.5-1cm³的小块,且保存液用量至少为组织体积的8-10倍。

l 配制时建议在洁净区操作,称量硫酸铵时佩戴口罩以防粉尘吸入,佩戴护目镜和耐酸碱手套。

l 配制好的保存液可在4℃稳定保存6个月以上[2]。

 

三、商业化便捷选择——杭州富沃克生物

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自己配制虽然配方清晰,但原料采购(尤其是高品质硫酸铵和EDTA)、无RNase环境控制、pH精确调节和批次稳定性都是不小的门槛。如果追求省心省力,可以直接选择成熟的商业化产品。

杭州富沃克生物科技有限公司推出的科研专用新鲜组织RNA保存剂,采用专业缓冲防护配方,可强效抑制核酸酶活性,有效延缓RNA降解,稳固维持核酸完整结构。产品能迅速渗透新鲜组织细胞内部,在非冻状态下原位稳定和保护细胞内的RNA。经保护的RNA在室温可保存7天,4℃可保存4周[1],-20℃或-80℃可长期保存。适配动物组织(肝、脑、心、肾、肌肉等)、培养细胞、细菌、真菌等多种样本类型。喷雾/浸泡双模式设计,操作简单,省去自行配制的繁琐与风险。

产品名称

规格

产品货号

新鲜组织RNA保存剂

1ml/50ml

ZZB606-01

邮箱:support@fwkbio.com

厂家联系微信号:19850855600

官网链接:科研非冻型组织RNA保存液 常温长效RNA稳定保存试剂-杭州富沃克生物科技有限公司

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参考文献

[1] Camacho-Sanchez M, Burraco P, Gomez-Mestre I, et al. Preservation of RNA and DNA from mammal samples under field conditions[J]. Molecular Ecology Resources, 2013, 13:663-673.

[2] 温州医科大学附属第一医院. 一种动物组织RNA的样品保存液及其保存方法: CN109609498A[P]. 2019-04-12.

[3] 中国医科大学(吕昌龙, 翟景波, 高植鹏, 王大南, 姜雪峰). 一种生物组织RNA保护试剂及其制备方法和应用: CN104673717A[P]. 2015-06-03.

 


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