告别1小时封闭！无蛋白快速封闭液配方原理与实战指南

做Western Blot的痛，谁做谁知道。 转膜、孵育抗体、洗膜，一套流程下来大半天就过去了。满怀期待地去显影，结果——条带没出来，背景却黑得像锅底。换抗体、调曝光时间、重新配试剂，折腾一圈，最后发现是最不起眼的“封闭”这一步出了问题。

一、封闭液是什么？一张膜的“防误触”保护层

WB的原理其实很像“钓鱼”：

你把蛋白从凝胶转移到膜上（PVDF膜或NC膜），这层膜就像一块强力双面胶——目标蛋白被粘住了，但膜上还有很多空白位置没有蛋白。

接下来你要孵一抗和二抗——抗体也是蛋白质，它们会非特异性地吸附到这些空白位置上。结果就是：目标条带没出来，背景却黑成一片。

封闭液的作用，就是用大量无关的大分子提前把这些空白位置全部“填满”，让抗体只能识别并结合你的目标蛋白。封闭做得好，条带才干净。

二、传统封闭 vs 快速封闭 [1][2][3]

三、快速封闭液的“黑科技”配方[2][5][6]

传统封闭液用的是动物来源的大分子蛋白（BSA、脱脂奶粉、酪蛋白等），靠它们物理填充膜上的空白位点。但动物蛋白成分复杂，可能含生物素、碱性磷酸酶残留，还可能和你的抗体“打架”——增加背景信号。

快速封闭液的核心思路是：不用动物蛋白，用化学合成物来封闭。

市面上主流的无蛋白快速封闭液，配方主要有以下几种技术路线：

1. 聚合物混合型：多种合成聚合物混合液，可快速填充固相支持物表面的空隙，减少非特异性信号的干扰。

2. 十二烷基类化合物型：如十二烷基肌氨酸钠、十二烷基磺酸钠、十二烷基硫酸钠、月桂基聚氧乙烯醚硫酸钠等。

3. 脂肪醇聚氧乙烯醚/脂肪胺聚氧乙烯醚型：脂肪醇聚氧乙烯醚、脂肪胺聚氧乙烯醚中的任一种，浓度范围0.1wt%-5wt%。

这些成分的共同特点是：不含任何蛋白成分，不会与抗体发生交叉反应，同时还能快速吸附到膜表面完成封闭。

四、10分钟快速封闭实战指南[4]

准备工作：转膜完成后，用TBST或PBST洗涤蛋白膜1-2分钟。

操作步骤：

1. 取液：根据膜的大小取适量快速封闭液。一张约6.6×8.5cm的常规膜，推荐用约10mL封闭液[4]。

2. 浸泡：用平头镊子夹住膜的一角，放入封闭液中，确保封闭液完全浸没膜。

3. 摇床封闭：置于水平摇床上，室温封闭10分钟[1][2][3]。

4. 直接孵育一抗：封闭完成后，无需洗涤，直接进入一抗孵育步骤。

关键提醒[1]：

l 对于一些背景较高的抗体，可以延长封闭时间至20-30分钟。

l 对于背景非常高的抗体，可尝试延长至30-60分钟。

l 如有特殊需要，也完全可以4℃封闭过夜。

五、商业化便捷选择——杭州富沃克生物

自己配制封闭液虽然听起来简单，但5%脱脂奶粉需要精确称量、充分溶解、过滤除菌，而且容易变质，不宜重复使用。BSA价格不菲，不同批次之间质量也不稳定。

如果追求省心省力，可以直接选择成熟的商业化产品。

杭州富沃克生物科技有限公司

邮箱：support@fwkbio.com

厂家联系微信号：19850855600

官网链接：科研级 WB 快速封闭液 + 一抗稀释液套装 低背景非特异性吸附抑制 蛋白免疫印迹 Western Blot 实验专用试剂-杭州富沃克生物科技有限公司

参考文献

[1] 碧云天生物技术. QuickBlock™封闭液(TBSTx)（P0233）产品说明书.

[2] 碧云天生物技术. QuickBlock™无蛋白Western封闭液（P0240）产品说明书.

[3] 康为世纪生物. Western Protein-Free Rapid Blocking Buffer（CW8011S）产品说明.

[4] 生物谷. 快速封闭液：仅需10分钟完成封闭！[EB/OL]. 2024-09-14.

[5] 专利. 一种封闭剂在无蛋白封闭液中的应用：CN115728490A.

[6] 专利. 一种用于蛋白检测的无蛋白快速封闭液及其应用：CN116930513B.