微生物实验“基本功”：酵母菌培养液配制全攻略

微生物实验“基本功”：酵母菌培养液配制全攻略

做微生物实验或者生物课的朋友都懂——酵母菌养了几天不繁殖、密度死活上不去、镜检找不到几个活的。你换了原料、调了温度、反复尝试，最后发现是培养液配方根本不对。

酵母菌培养液（也叫YPD/YEPD培养基、酵母培养基）是微生物实验室最常用的真菌培养基之一，广泛应用于酵母菌培养、分子克隆、蛋白质表达等实验场景【3】。配方不对，酵母菌根本不长。

那这个培养液到底是什么？怎么配才靠谱？今天一文讲清楚。

一、酵母菌培养液是什么？

酵母菌培养液是为酵母菌提供生长繁殖所需营养的液体或固体培养基。最经典的配方是YPD培养基（Yeast Extract Peptone Dextrose），也叫YEPD，由酵母提取物、蛋白胨和葡萄糖组成。

它的核心成分及作用：

1. 酵母提取物：提供B族维生素、氨基酸和含氮营养物质

2. 蛋白胨：提供碳源和氮源

3. 葡萄糖：提供碳水化合物和能量来源

4. 琼脂（固体培养基）：凝固剂，用于制备平板或斜面

二、常用配方与配制方法

配方一：YPD液体培养基（最通用）【3】

操作步骤【3】：

 关键点：葡萄糖必须单独灭菌后加入，不能与蛋白胨、酵母提取物混合后一起高压灭菌，否则会发生美拉德反应（糖与氨基酸反应），产生不溶性深褐色物质，酵母无法利用且有害，损害培养基营养价值。

配方二：YPD固体培养基（平板/斜面）

在液体配方基础上，每升加入15~20 g琼脂。

操作步骤：

1. 称取蛋白胨20g、酵母提取物10g和琼脂15~20g，加入蒸馏水

2. 加热煮沸至琼脂完全溶解（琼脂需加热至90℃以上才能完全溶解）

3. 定容至900 mL，121℃高压灭菌20分钟（或115℃灭菌15分钟）

4. 葡萄糖单独配成20%溶液，过滤除菌

5. 培养基冷却至约50~55℃时，无菌加入葡萄糖溶液，混匀

6. 在超净工作台倒平板或制斜面

7. 斜面制备：倾斜约45°放置，冷却凝固后备用

三、关键提醒

⚠️ 灭菌必须到位：培养基必须121℃高压灭菌20分钟（或115℃灭菌15分钟），否则杂菌污染会让酵母菌完全长不出来。

⚠️ 葡萄糖必须单独灭菌：将葡萄糖与蛋白胨、酵母提取物混合后一起灭菌会产生美拉德反应，影响酵母菌生长。葡萄糖应单独配成20%溶液，过滤除菌后再加入冷却的培养基中。

⚠️ 琼脂要充分煮沸溶解：琼脂需加热煮沸至完全溶解（通常需90℃以上），仅加热至70℃无法完全溶解。

⚠️ 倒平板/制斜面的温度：灭菌后冷却至50~55℃再倒平板或制斜面，温度过高会烫死接种的酵母菌，过低琼脂会提前凝固。

⚠️ 无菌操作：接种、倒平板等操作必须在超净工作台进行，避免杂菌污染。

⚠️ 保存条件：配制好的培养基4℃密封保存，建议2周内用完。

⚠️ 酵母菌培养温度：最适生长温度22~28℃，培养48小时左右即可观察到明显菌落。

四、常见问题

五、省心之选：杭州富沃克生物

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参考文献

[1] BeyoPure™ YPD Broth (premixed powder)产品说明. 碧云天

[2] YPD培养基. 百度百科

[3] YPD培养基配制方法. 丁香通, 2013

[4] 酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基(YPD). 生物在线, 2023