跑完胶放到成像仪下一看——一片空白。导师沉默三秒:“染料加了没?”你默默把胶扔了重做。
今天这篇把核酸染料那点事儿讲清楚。看完你至少知道:选哪个?怎么用?注意啥?
核酸染料让看不见的DNA/RNA在凝胶上“现形”【1】。染料特异性结合核酸后在特定波长光照下发出荧光【2】。结合方式主要有嵌入、静电结合、沟槽结合三种,不同染料侧重的机制不同。
一旦结合,荧光强度暴增数十至数百倍——看不见的DNA就亮了。
染料 | 颜色 | 激发光源 | 安全性 | 灵敏度 | 稳定性 | 适合谁 |
EB | 橙红 | 紫外~300nm | ❌强诱变剂,能穿透细胞膜【3】 | +++ | ++++ | 预算有限、做好防护的老手 |
GelRed | 橙红 | 主激发279nm;可用302/312nm紫外 | ✅工作浓度下Ames试验阴性。大分子不能穿透细胞膜【5】 | ++++ | +++++ | 有紫外成像仪、想替代EB——首选 |
GelGreen | 绿 | 激发507nm;兼容254nm紫外或488nm蓝光 | ✅工作浓度下Ames试验阴性。不能穿透细胞膜【5】 | ++++ | ++++ | 有蓝光成像仪,或想避免紫外损伤 |
SYBR Green I | 绿 | ~497nm;二级~290/380nm | ⚠️可穿透活细胞膜【9】,致突变性低于EB | ++++ | ++ | qPCR、灵敏度要求极高 |
SYBR Safe | 绿 | ~280/502nm | ⚠️Ames试验致突变性低于EB,但非零风险【14】 | +++ | ++++ | 注重安全的实验室 |
GoldView | 绿 | ~490nm | ❌主要成分=吖啶橙(已知诱变剂)【11】 | ++ | +++ | 强烈不推荐 |
GelRed:主激发279nm,发射~600nm橙红光。与EB光谱一致,可直接用现有紫外成像仪,不换设备【7】。
GelGreen:激发507nm,发射528nm绿光。兼容蓝光成像仪,也可用254nm紫外【8】【10】。
一句话:有紫外成像仪→GelRed;有蓝光成像仪→GelGreen。
商品化核酸染料多为10000×浓缩液,按1:10000稀释【10】。
胶染法(推荐) :每50mL琼脂糖胶加5μL染料,摇匀倒胶——GelRed/GelGreen可直接加入热胶【10】。
泡染法:电泳后将凝胶泡在1×染液中(储备液按1:3333稀释,即50mL溶液加15μL染料),摇床孵育30分钟【2】【10】。
保存:GelRed/GelGreen 2~8°C避光保存≥12个月;SYBR Green I需-20°C【13】。
① 以为“无毒”就上手摸 ❌ → 任何试剂都不建议接触皮肤,戴手套。
② 把EB不当回事 ❌ → 强诱变剂,戴手套、通风橱操作,废液按危废处理【3】。
③ SYBR Green I当EB用 ❌ → 稳定性差,需-20°C保存【13】,且能进入活细胞【9】。
④ 成像系统不兼容 ❌ → GelRed配紫外,GelGreen配蓝光(或254nm紫外)【7】【8】。
⑤ 买到成分不明的廉价染料 ❌ → 部分“安全染料”实际是吖啶橙。选有明确成分和Ames数据的正规产品。
杭州富沃克生物科技有限公司提供两款成品——开瓶即用,10000×:
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[1] Qihengxing. 核酸染料应用指南. 2025.
[2] Biomart. 干货分享|实用核酸染料小知识. 2022.
[3] Biomart. EB(溴化乙锭)到底有多毒. 2025.
[5] Biotium. GelRed® & GelGreen® Nucleic Acid Gel Stains.
[7] Fluorofinder. GelRed Spectral Data.
[8] Fluorofinder. GelGreen Spectral Data.
[9] BenchChem. SYBR Green I Mechanism of Action.
[10] Tiosbio. 10000×GelGreen核酸染料产品说明.
[11] Solarbio. GoldView I型核酸染色剂说明书.
[13] Sigma-Aldrich. SYBR Green I Product Information.
[14] Thermo Fisher. SYBR Safe DNA Gel Stain Product Information.
[15] 杭州富沃克生物科技有限公司. 高灵敏10000×核酸染料(HSR606).
[16] 杭州富沃克生物科技有限公司. 安全低毒10000×核酸染料.
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