DNase I 溶液

DNase I溶液 | 脱氧核糖核酸酶I | 无RNase | 重组牛源 | CAS:9003-98-9

别名：DNase I、去氧核糖核酸酶I、RNase-free DNase I

一、产品概述

富沃克生物推出的DNase I溶液（脱氧核糖核酸酶I）是一款高品质的分子生物学级工具酶。本品采用重组大肠杆菌或毕赤酵母（Pichia pastoris）表达系统生产，经色谱纯化获得，不含RNase残留、不含蛋白酶活性，浓度准确、酶活稳定。DNase I是一种非特异性核酸内切酶，能够高效降解单链和双链DNA，产生具有5‘-磷酸基团和3’-羟基末端的二核苷酸、三核苷酸和寡核苷酸产物。产品以超纯水配制，含50%甘油及钙离子保护液，开瓶即用，有效避免自行配制时酶活不稳定的问题。

在分子生物学实验中，RNA样品的纯度直接决定了RT-PCR、qPCR、Northern Blot及RNA-Seq等下游实验的成败。然而，在RNA提取过程中，基因组DNA（gDNA）往往与RNA同时释放，难以完全分离。即使微量的DNA残留，也可能在反转录或PCR反应中作为模板被非特异性扩增，导致假阳性结果。DNase I能够有效解决这一难题——在RNA提取过程中或提取后，通过DNase I处理，可将残留的基因组DNA彻底降解，获得高纯度、无DNA污染的RNA样品，确保下游实验结果的真实可靠。

本品需-20℃冷冻保存，现货供应，欢迎分子生物学实验室及科研单位老师选购。

二、技术原理

DNase I的作用机制基于对DNA分子的特异性水解。作为一种内切核酸酶，DNase I能够水解DNA分子骨架上的磷酸二酯键，产生含有5‘-磷酸基团和3’-羟基末端的单核苷酸和寡核苷酸。该酶的活性严格依赖于钙离子（Ca²⁺） 作为辅因子以维持酶分子活性结构的稳定，同时可被镁离子（Mg²⁺） 或锰离子（Mn²⁺） 激活。

二价金属离子对剪切模式的调控：DNase I的剪切模式随激活离子的不同而变化：

• Mg²⁺存在条件下：DNase I可随机剪切双链DNA的任意位点，两条链的切割独立发生、呈统计学随机分布

• Mn²⁺存在条件下：DNase I可在同一位点剪切DNA双链的两条链，形成平末端或仅含1-2个核苷酸突出的粘末端

本品采用重组表达系统生产，从根本上避免了传统牛胰腺提取法可能存在的RNase残留问题。经严格纯化后，产品不含RNase及其他DNA内切酶和外切酶。储存缓冲液为50mM Tris-acetate (pH7.5)、10mM CaCl₂、50%甘油，确保酶在-20℃保存条件下的长期稳定性。

三、核心优势

1. 无RNase残留，安全用于RNA实验

本品经过严格的纯化工艺处理，确保不含任何RNase活性。在消化DNA的过程中，RNA样品不会受到任何外源性RNase的降解，RNA的完整性和质量得到充分保障，可直接用于对RNA质量要求极高的RT-PCR、qPCR及RNA-Seq等下游实验。

2. 重组表达，批次稳定

采用重组大肠杆菌或毕赤酵母表达系统，经色谱纯化获得。相比传统牛胰腺提取法，重组表达可有效避免原料来源复杂导致的批次间差异，保证产品均一性和批次间稳定性。生产过程不使用任何动物源原料，无动物源性。

3. 高效去除DNA污染

DNase I能够高效降解单链和双链DNA至寡核苷酸和单核苷酸，可有效去除RNA制备产物中残留的基因组DNA。经DNase I处理后的RNA样品，DNA残留量显著降低，可安全用于各类下游分析。

4. 提供完整的灭活解决方案

本品配套提供EDTA溶液，用于酶反应后的有效终止。DNase I的失活可通过先加入EDTA至终浓度2.5-10mM螯合必需的二价金属离子，再经65-75℃加热5-15分钟实现彻底灭活。这一“先螯合、后加热”的顺序至关重要——先加入EDTA可防止高温下Mg²⁺诱导RNA的自发降解。

5. 兼容多种下游应用

经DNase I处理并失活后的RNA样品，可直接用于逆转录、qPCR、Northern Blot、RNA-Seq文库构建等多种下游实验。

6. 底物多样性

DNase I可以作用于单链DNA、双链DNA、染色质和RNA:DNA杂交链。

四、技术参数

五、主要应用场景

DNase I的应用极为广泛，覆盖了分子生物学研究的多个核心领域：

六、使用说明

RNA样品中DNA去除的标准操作流程：

1. 在无RNase的EP管中依次加入：

• RNA样品（1μg）：适量

• Reaction Buffer (10×)：1μL

• DNase I（1U/μL）：1μL

• 无RNase水：补至10μL

2. 轻轻混匀，短暂离心收集液体

3. 37℃孵育15-30分钟，充分降解gDNA

4. 加入1μL 50mM EDTA（终浓度约2.5-5mM），混匀

5. 65-75℃加热5-15分钟使DNase I彻底失活

6. 短暂离心收集液体，冰上冷却，即可用于下游实验

注意事项：

• 所有试剂和耗材必须保证无RNase污染

• RNA样品应全程在冰上操作，避免高温导致RNA降解

• 酶的失活必须遵循“先加EDTA、后加热”的顺序，不可颠倒

• DNase I对物理变性敏感，混合时应轻轻颠倒混匀，请勿涡旋震荡

• 酶在使用时应置于冰盒内或冰浴上，使用完毕后立即放回-20℃保存

• 如需对酶进行稀释，应用酶储存溶液（50mM Tris-acetate pH7.5，10mM CaCl₂，50%甘油）进行稀释

• 每1μg RNA使用不超过1U的DNase I

七、DNase I的失活与抑制

有效失活方法：

• 加入EDTA至终浓度2.5-10mM后，65-75℃加热5-15分钟

• 酚-氯仿抽提

抑制作用：

• 金属离子螯合剂（EDTA、EGTA）

• 毫摩尔级浓度的锌离子（Zn²⁺）

• 0.1% SDS

• DTT、β-巯基乙醇等还原剂

• 50-100mM以上盐浓度

八、注意事项

• 本产品仅供科研使用，不得用于临床诊断或治疗

• 为了您的安全和健康，操作时请穿实验服并佩戴一次性手套

• 所有试剂和耗材需保证无RNase污染

• 酶使用时宜放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后立即放置于-20℃保存

九、储存条件与有效期

• 保存温度：-20℃保存

• 运输条件：干冰或冰袋运输

• 复验期：2年

十、订购信息

本产品现货供应，提供多种规格以满足不同实验需求。欢迎各分子生物学实验室、科研院所、医疗机构及生物医药企业来电来函咨询选购。富沃克生物提供专业的技术支持与售后服务。

富沃克生物 —— 专注生命科学工具，以高品质工具酶保障RNA实验的纯净与精准。

淘宝购买链接：脱氧核糖核酸酶I /DNA酶/ DNase I 试剂200 U 去除DNA RNase Free

厂家联系微信号（同手机号）：19850855600

或扫二维码添加微信，可免费领取试用装（包邮）：