蛋白酶K（Proteinase K）

蛋白酶K（Proteinase K）｜产品技术说明书.pdf

蛋白酶K（Proteinase K）
广谱丝氨酸蛋白酶｜高活性｜核酸提取专用｜分子生物学级｜不含DNase/RNase

别名：蛋白激酶K、枯草蛋白酶、Proteinase K溶液、肽链内切酶K

一、产品概述

富沃克生物推出的蛋白酶K（Proteinase K）是一款高品质分子生物学级蛋白酶产品。本品来源于林伯氏白色念球菌（Tritirachium album Limber），属于枯草杆菌蛋白酶家族的广谱丝氨酸蛋白酶。因其能高效降解角蛋白（Keratin）而得名，具有极高的比活性和广泛的底物特异性，是核酸提取、蛋白降解及各类分子生物学实验中不可或缺的核心工具酶。

本产品经过严格纯化，不含DNase和RNase，酶活力大于30U/mg，相对分子量约为28.9-29.3kDa，以高纯度冻干粉形式供应，质量稳定可靠。适用于基因组DNA/RNA提取过程中的蛋白质降解、核酸酶去除、石蜡包埋组织切片抗原修复、脉冲场电泳染色体DNA制备、蛋白质印迹及原位杂交等多种实验场景。产品现货供应，欢迎分子生物学实验室及科研单位老师选购。

二、技术原理与结构特性

蛋白酶K属于丝氨酸蛋白酶家族，其活性催化中心由Asp39、His69和Ser224构成典型催化三联体结构。与枯草杆菌蛋白酶相比，蛋白酶K结构中还含有二硫键和两个Ca²⁺结合位点；得益于这些特殊结构，蛋白酶K在高温环境和广泛pH条件下仍能保持活性和优异的稳定性。

催化机制：蛋白酶K通过其活性中心的丝氨酸残基对底物肽键发起亲核攻击，优先水解与疏水性氨基酸、含硫氨基酸及芳香族氨基酸（如苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸）C末端邻接的肽键和酯键，将蛋白质逐步降解为短肽和氨基酸。

酶活性与稳定性：本产品在极宽的pH范围（4.0-12.5）内均能保持活性，最适pH为7.5-8.0。在SDS（0.1-0.5%）、尿素（约10mM）等蛋白质变性剂存在下，蛋白酶K的活性反而增强。EDTA等金属螯合剂对蛋白酶K的活性有一定抑制作用，可通过适量添加Ca²⁺加以缓解。常用浓度的Triton X-100、Tween 20、Sarkosyl、盐酸胍对酶活力影响不大。

反应温度优化：蛋白酶K的最佳反应温度为50-65℃。值得注意的是，在65℃或更高温度下，蛋白酶K自身的降解也会加速。因此，多数实验方案推荐在50-55℃条件下使用。在37℃下可进行过夜消化，在56℃下可维持活性长达4小时。通过95℃加热10分钟可使蛋白酶K完全失活。

三、核心优势

1. 分子生物学级品质，不含DNase/RNase：本产品经过严格的质量控制，经检测确认不含DNase和RNase。以λDNA为底物，37℃消化4小时以上未检出脱氧核糖核酸酶活性；以RNA为底物，25℃消化16小时以上未检出核糖核酸酶活性。这一特性使其在RNA提取中尤为关键——可有效防止外源性RNase污染导致的RNA降解。

2. 高活性，高效降解蛋白质：酶活力大于30U/mg，能够高效降解与核酸结合的组蛋白及其他蛋白质，促进高分子量核酸的释放与纯化。在核酸提取过程中，蛋白酶K同时能彻底水解DNase和RNase，有效防止目标核酸被降解。

3. 耐受变性剂，适用复杂体系：在SDS、尿素等蛋白质变性剂存在下活性更高。这一特性使其特别适用于含高浓度去垢剂的核酸裂解体系，无需额外去除变性剂即可高效工作。

4. 应用场景广泛：从基础核酸提取到原位杂交、从蛋白印迹到脉冲场电泳，蛋白酶K在多条实验路径中发挥着不可替代的作用。

5. 病毒灭活功能：蛋白酶K可使病毒蛋白变性失活，降低传染性，提高运输和检测阶段的安全性。

四、主要应用场景

五、使用说明

储存液配制：将冻干粉溶解于无菌20mM Tris-HCl（pH7.4）、1mM CaCl₂缓冲液中，配制成20mg/mL储存液。使用低蛋白吸附的0.22μm滤器过滤除菌后分装。如需长期4℃保存，可加入等体积无菌甘油配制成含50%甘油的储存液。

工作浓度：常用工作浓度为50-200μg/mL，具体浓度需根据所用缓冲液是否含有SDS、尿素及反应温度等因素确定。

操作要点：

• 核酸提取中按试剂盒说明书推荐量添加蛋白酶K储存液

• 推荐在50-55℃条件下孵育30-60分钟以实现最佳消化效果

• 反应结束后可通过95℃加热10分钟使蛋白酶K完全失活

六、储存条件

• 冻干粉：4℃干燥保存，有效期3年；-20℃可更长期保存

• 储存液（20mg/mL） ：分装后-20℃保存，避免反复冻融

• 含50%甘油的储存液：4℃保存可达1年

• 运输条件：冰袋运输

七、注意事项

• EDTA等金属螯合剂会抑制蛋白酶K活性，确保反应体系中不含金属螯合剂或适量添加Ca²⁺

• 建议分装保存，避免反复冻融导致酶活力下降

• 融化后可在4℃短期保存并尽快使用

• 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套和口罩操作

八、订购信息

本产品现货供应，提供多种规格（100mg、1g等），支持批量采购。欢迎各分子生物学实验室、科研院所、医疗机构及生物医药企业来电来函咨询选购。富沃克生物提供专业的技术支持与售后服务。

富沃克生物 —— 专注生命科学工具，以高品质蛋白酶K赋能核酸提取与蛋白研究的每一个环节。

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