荧光定量PCR 试剂盒（SYBR Green qPCR Mix）Fwkbio 5X 1ml qPCR

荧光定量PCR试剂盒（SYBR Green qPCR Mix）｜产品技术说明书.pdf

荧光定量PCR试剂盒（SYBR Green qPCR Mix）

Fwkbio 5X 1mL qPCR 2×预混液｜基因表达分析专用｜适配主流荧光定量PCR仪｜含ROX参比染料（可选）

别名：SYBR Green预混液、实时定量PCR Mix、染料法qPCR预混液、通用型荧光定量PCR试剂

一、产品概述

富沃克生物推出的荧光定量PCR试剂盒（SYBR Green qPCR Mix）是一款专为实时荧光定量PCR（qPCR）设计的高品质预混液。本产品采用SYBR® Green I嵌合荧光法进行Real Time PCR检测，将热启动DNA聚合酶、dNTPs、优化反应缓冲液、SYBR Green I荧光染料及稳定剂等全部通用组分预先混合为2×浓度的即用型预混液。使用时仅需加入模板、引物和去离子水即可直接进行qPCR反应，操作极其简便，可最大限度减少人为误差、节约实验操作时间、降低污染几率。

本产品适用于基因表达分析、低拷贝数基因检测、病原体检测、基因敲除验证及SNP基因分型等多种实验场景。可根据不同荧光定量PCR仪选配ROX参比染料，以校正孔间荧光信号误差，兼容Applied Biosystems、Bio-Rad、Roche、Stratagene等主流品牌荧光定量PCR仪。产品需-20℃避光保存，现货供应，欢迎分子生物学实验室及科研单位老师选购。

二、技术原理

SYBR Green I嵌合荧光检测原理：SYBR Green I是一种结合于双链DNA（dsDNA）双螺旋小沟区域的绿色荧光染料。在游离状态下，其荧光信号非常微弱；一旦与PCR扩增过程中产生的双链DNA结合后，荧光信号会大大增强。随着PCR循环的推进，扩增产物呈指数增长，与之结合的SYBR Green I染料分子也随之增加，荧光信号强度与双链DNA产物的数量呈正相关。通过实时检测每一循环结束后的荧光强度，即可实现对起始模板的准确定量。

热启动酶技术：本产品采用高品质热启动DNA聚合酶，有效避免低温条件下由引物和模板DNA非特异性退火或引物二聚体引起的非特异性扩增。在PCR反应的预变性步骤中，酶被加热激活，确保仅在预变性之后才会释放DNA聚合酶活性。部分型号采用新型HotMaster Taq DNA聚合酶，利用抑制剂通过温度调节方式封闭酶的底物结合位点——温度低于40℃时形成非活性的酶-抑制剂复合物，当温度升高至引物特异性的退火温度时，结合平衡向模板-特异性引物复合物形成方向移动，从而最大限度减少PCR扩增全程中的非特异性扩增产物。这一机制大大提高了PCR反应的特异性、灵敏度和定量检测的准确性。

ROX参比染料校正原理：ROX是一种惰性荧光染料，不参与PCR反应，荧光信号值在反应过程中保持稳定。在qPCR反应过程中，由于反应总体积的差异、孔的位置不同、管壁厚度差异等因素会导致荧光激发效率的差异。ROX染料可用于校正由于不均匀照明、孔与孔之间的光学差异（如液滴、气泡）以及反应体系浓度差异等因素引起的荧光信号变化，通过归一化校正使不同孔之间的数据具有可比性。

三、核心优势

1. 高特异性，有效避免非特异性扩增：热启动DNA聚合酶配合针对SYBR Green I嵌合荧光法优化的最适Buffer，可有效抑制非特异性扩增。优化的预混液体系确保仅在目标序列上发生特异性扩增，数据结果更加可靠。

2. 高灵敏度，可检测低拷贝数模板：产品具有卓越的检测灵敏度，可对低至数个拷贝数的DNA模板进行准确定量检测。适用于微量样本或低表达基因的检测，在宽广的定量区域内均可获得良好的标准曲线。

3. 扩增效率高，定量准确：核心组分采用高品质热启动DNA聚合酶，配合优化的缓冲体系及PCR反应促进因子，具有扩增效率高、稳定性好等特点。靶基因定量准确、重复性好、可信度高。对100-300bp的DNA片段具有良好的扩增效果，并能有效应对高GC或高AT含量的复杂模板。

4. 2×预混液，操作极简：产品为2×浓度的预混液，已包含除引物和模板以外的所有qPCR组分。使用时只需加入模板、引物和水，稀释至1×工作浓度即可进行反应。可最大限度地减少人为误差、节约PCR实验操作时间、降低污染几率。部分型号可常温配制反应体系，无需冰上操作。

5. ROX参比染料灵活可选，适配主流机型：产品提供含ROX及不含ROX多种版本，用户可根据qPCR仪器技术指导决定是否需要加ROX及加入浓度。不同仪器的激发光学系统有所不同，ROX染料的浓度须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。兼容Applied Biosystems、Bio-Rad、Roche、Stratagene等主流品牌荧光定量PCR仪。

6. 稳定性好，批次间一致：采用优化的缓冲体系和稳定剂配方，产品具有良好的批间稳定性和重现性。在正确保存条件下可保持长期活性，解冻后短暂存放于4℃亦不影响使用性能。

四、适用场景

五、技术参数

六、ROX参比染料选择指南

不同荧光定量PCR仪对ROX的要求不同，请根据实际所用仪器选择合适版本：

七、使用说明

反应体系配制（以20μL反应体系为例）：

参考扩增程序（二步法）：

注意事项：

• 使用前务必充分融解混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡

• 建议在超净工作台内配制，使用无核酸酶残留的枪头和反应管

• 推荐使用带滤芯的枪头，避免交叉污染和气溶胶污染

• SYBR Green I强光下易分解，操作时应避免强光照射

• 解冻后如出现少量白色沉淀，室温放置片刻并上下颠倒使其溶解，充分混匀后使用

八、储存条件

• -20℃避光保存，至少可保存12个月

• 使用前充分融解混匀，避免反复冻融

• 短期使用可存放于4℃避光条件下

九、订购信息

本产品现货供应，提供含ROX及不含ROX多种版本，支持多种规格（1mL/5mL）批量采购。欢迎各分子生物学实验室、科研院所、医疗机构及生物医药企业来电来函咨询选购。富沃克生物提供专业的技术支持与售后服务。

富沃克生物 —— 专注生命科学工具，以优质产品赋能基因表达定量研究的每一个环节。

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