细胞/细菌样本总RNA提取试剂盒

细胞｜细菌总RNA提取试剂盒（离心柱型）｜产品技术说明书.pdf

细胞/细菌总RNA提取试剂盒（离心柱型）
动物细胞/细菌RNA纯化｜含DNase I高效去除DNA｜无酚氯仿｜科研专用

别名：细胞RNA提取试剂盒、细菌RNA快速提取试剂盒、总RNA纯化试剂盒、离心柱型RNA提取试剂盒

一、产品概述

富沃克生物推出的细胞/细菌总RNA提取试剂盒（离心柱型）是一款专为培养动物细胞及细菌样本设计的高品质总RNA纯化产品。本试剂盒采用硅胶膜离心柱技术与优化的裂解体系，配合膜过滤及DNase I柱上消化，可高效去除基因组DNA，30-40分钟即可完成总RNA提取。整个过程无需使用酚和氯仿等有毒试剂，操作安全便捷。

本产品适用于从培养的动物细胞（贴壁细胞及悬浮细胞）以及革兰氏阳性/阴性菌中快速提取高纯度总RNA。提取的RNA纯度高、完整性好，无蛋白和其他杂质污染，OD260/280比值可达1.9-2.2，可直接用于RT-PCR、qPCR、Northern Blot、cDNA文库构建等下游实验。试剂盒包含裂解液、去蛋白液、漂洗液、RNase-Free水、过滤柱、吸附柱及收集管等全套组分，操作便捷，室温保存（DNase I需-20℃保存）。产品现货供应，欢迎分子生物学实验室及科研单位老师选购。

二、技术原理

本试剂盒基于经典的硅胶膜离心柱核酸分离技术。硅胶膜表面的硅醇基团呈弱酸性，水化后带负电。在高离序盐（如盐酸胍）条件下，RNA选择性地吸附于离心柱内硅基质膜上；而蛋白质、多糖及其他代谢产物不被吸附，通过离心被有效去除。随后经过去蛋白液和漂洗液的多次洗涤，进一步去除细胞代谢物、蛋白及盐离子等杂质；最后用低盐的RNase-Free水将纯净RNA从硅胶膜上洗脱下来。

DNase I柱上消化：本试剂盒采用膜过滤及DNase I消化技术，可在RNA结合于硅胶膜上时，直接对膜上的核酸进行DNase I处理。这一设计可高效去除残留的基因组DNA，避免DNA对下游qPCR等定量实验的干扰。DNase I已包含在试剂盒内，无需单独购买。

裂解与RNase抑制：独特的裂解液可迅速裂解细胞和灭活细胞内源RNase，有效保护RNA完整性。RNA在裂解液中不会被RNase降解，为后续操作提供了充分的安全保障。

三、核心优势

1. 高效去除基因组DNA：采用膜过滤技术配合DNase I柱上消化，可高效去除基因组DNA。提取的RNA中无DNA残留，可直接用于对DNA污染高度敏感的RT-PCR、qPCR等定量实验。

2. 操作快速，30-40分钟完成：整个提取流程仅需30-40分钟即可完成多个样品的总RNA提取。相比传统TRIzol法需1小时以上的操作时间，大幅缩短实验周期，提升工作效率。

3. 安全低毒，无需酚氯仿：全程无需使用酚、氯仿等有毒有机试剂。避免了有机试剂对操作者的健康危害及特殊的废液处理要求，实验安全性更高。

4. RNA纯度高、完整性好：提取的总RNA纯度高，无蛋白和其他杂质污染。OD260/280比值可达1.9-2.2，可直接用于对纯度要求严苛的下游实验。

5. 适用范围广：适用于培养的动物细胞（贴壁细胞及悬浮细胞）以及革兰氏阳性/阴性菌等多种样本类型。每个吸附柱可处理5×10⁶细胞或适量细菌样本。

6. 操作简便，步骤标准化：基于硅胶柱纯化技术，操作流程标准化、易于掌握。无需乙醇沉淀等繁琐步骤，RNA可直接从离心柱上洗脱。

四、产品组成

五、操作流程

（一）细胞样本处理

悬浮细胞：估计细胞数量（不超过1×10⁷），300×g离心5分钟收集细胞，仔细去除所有培养基上清。

贴壁细胞：可直接在培养容器中裂解（容器直径不超过10 cm），彻底吸除细胞培养基上清后立即加入裂解液；或使用胰蛋白酶处理收集细胞沉淀后再行裂解。

（二）细菌样本处理

离心收集适量菌液（10⁵-10⁷细胞），尽可能去除上清。

（三）裂解与RNA结合

1. 向细胞或细菌沉淀中加入适量裂解液，充分振荡使样品完全裂解

2. 将裂解产物转移至过滤柱（CS柱）中，离心去除不溶物

3. 向滤液中加入乙醇，调节结合条件

4. 将混合液转移至吸附柱中，离心使RNA结合于硅胶膜上

（四）DNase I柱上消化

1. 配制DNase I工作液（DNase I + DNase Buffer）

2. 将DNase I工作液直接加至吸附柱膜中央

3. 室温静置消化，去除残留基因组DNA

（五）洗涤与洗脱

1. 加入去蛋白液，离心洗涤

2. 加入漂洗液，离心洗涤（重复一次）

3. 开盖晾干吸附柱，去除残留乙醇

4. 将RNase-Free水加至吸附柱膜中央，静置后离心洗脱

5. 收集纯化后的总RNA，立即使用或分装-80℃保存

六、应用场景

七、注意事项

• 预防RNase污染：建议在专门进行RNA实验的超净台中操作，经常更换新手套，使用RNase-Free的耗材

• 样本用量控制：细胞数量不宜超过1×10⁷，过量可能影响裂解效果及RNA质量

• 漂洗液预处理：第一次使用前需在漂洗液中加入指定量的无水乙醇

• 裂解液沉淀处理：裂解液在储存中可能形成沉淀，若有沉淀出现，请加热溶解后使用

• DNase I工作液现配现用：DNase I工作液需现用现配，不宜长期存放

• 洗脱优化：RNase-Free水需直接加至膜中央，并静置2分钟后再离心，必要时可进行二次洗脱以提高产量

八、储存条件与有效期

• RNase-Free DNase I和DNase Buffer：-20℃保存

• 其余组分：常温（10-25℃）保存

• 有效期：自生产之日起12个月

• 运输条件：湿冰运输

九、订购信息

本产品现货供应，提供50次等多种规格，DNase I已包含在试剂盒内，无需单独购买。欢迎各分子生物学实验室、科研院所、医疗机构及生物医药企业来电来函咨询选购。富沃克生物提供专业的技术支持与售后服务。

富沃克生物 —— 专注生命科学工具，以高品质RNA提取试剂盒赋能基因表达研究的精准与高效。