DNase I 试剂 200U RNase Free/脱氧核糖核酸酶 I / DNA酶

DNase I（脱氧核糖核酸酶 I，RNase Free）｜产品技术说明书.pdf

DNase I 脱氧核糖核酸酶 I (RNase Free)
200U 无RNase 脱氧核糖核酸酶 I｜RNA样本DNA污染去除专用｜分子生物学级

别名：脱氧核糖核酸酶I、RNase-free DNase I、DNA酶I、去氧核糖核酸酶I

一、产品概述

富沃克生物推出的DNase I（脱氧核糖核酸酶 I）是一款高品质分子生物学级核酸工具酶。本品来源于牛胰腺或通过重组表达系统生产，经过严格纯化，确保不含RNase（核糖核酸酶）活性，同时不含其他DNA内切酶和外切酶污染，可安全用于各类RNA样品的处理。酶活力为200U，能够高效、特异性地降解单链或双链DNA，是RNA样本制备和纯化过程中去除基因组DNA污染的核心工具酶。

在分子生物学实验中，RNA的质量直接决定下游实验数据的准确性与可靠性。然而，在RNA提取过程中，基因组DNA（gDNA）往往与RNA同时释放，难以完全分离。即使微量的DNA残留，也可能在RT-PCR或qPCR反应中作为模板被非特异性扩增，导致假阳性结果，严重影响基因表达定量、转录组分析等实验的准确性。DNase I能够有效解决这一难题——在RNA提取过程中或提取后，通过DNase I处理，可将残留的基因组DNA彻底降解，获得高纯度、无DNA污染的RNA样品，确保下游实验结果的真实可靠。

本产品用途广泛，不仅适用于RNA提取中的DNA污染去除，还可用于体外转录后DNA模板的去除、DNase I足迹法研究DNA-蛋白质相互作用、缺口平移法进行DNA标记、产生DNA随机片段文库以及细胞凋亡TUNEL检测中的阳性对照制备等等多种分子生物学实验场景。产品现货供应，欢迎分子生物学实验室及科研单位老师选购。

二、技术原理

酶学特性与作用机制：DNase I是一种非特异性核酸内切酶，能够降解双链和单链DNA及染色体DNA。它通过水解DNA分子骨架上的磷酸二酯键，产生含有5'-磷酸基团和3'-羟基末端的单核苷酸和寡核苷酸。该酶的活性严格依赖于二价金属离子——需要Ca²⁺作为辅因子以维持酶分子活性结构的稳定，同时可被Mg²⁺或Mn²⁺激活。

二价金属离子对剪切模式的调控：DNase I的剪切模式随激活离子的不同而变化：

• Mg²⁺存在条件下：DNase I可随机剪切双链DNA的任意位点，两条链的切割独立发生、呈统计学随机分布，产生带有不同长度突出末端的DNA片段

• Mn²⁺存在条件下：DNase I可在同一位点剪切DNA双链的两条链，形成平末端或仅含1-2个核苷酸突出的粘末端

最适反应条件：DNase I的最适工作pH范围为7.0-8.0。在含有Mg²⁺与Ca²⁺且不含其他盐的缓冲液中具有最高活性；当盐浓度（NaCl或KCl）从0增加到30mM时，酶活性会降低2倍以上。

三、核心优势

1. 无RNase活性，安全用于RNA实验：本品经过严格的纯化工艺处理，确保不含任何RNase活性。这意味着在消化DNA的过程中，RNA样品不会受到任何外源性RNase的降解，RNA的完整性和质量得到充分保障，可直接用于后续的RT-PCR、qPCR等对RNA质量要求极高的实验。

2. 高效去除DNA污染：DNase I能够高效降解单链和双链DNA至寡核苷酸和单核苷酸，可有效去除RNA制备产物中残留的基因组DNA（通常可处理含量低于10μg/ml的DNA污染）。经DNase I处理后的RNA样品，DNA残留量显著降低，可安全用于各类下游分析。

3. 多重来源选择，适配不同需求：产品提供牛胰腺来源及重组表达来源等多种版本：

• 牛胰腺来源：来源广泛，可实现批量化生产，酶活高

• 重组来源：通过毕赤酵母或大肠杆菌重组表达，可有效避免动物源成分，降低RNase污染风险

4. 提供完整的失活解决方案：本品配套提供EDTA溶液，用于酶反应后的有效终止。DNase I的失活可通过先加入EDTA（终浓度2.5-10mM）螯合必需的二价金属离子，再经65℃加热10分钟实现彻底灭活。这一“先螯合、后加热”的顺序至关重要——先加入EDTA可防止高温下Mg²⁺诱导RNA的自发降解。

5. 兼容多种下游应用：经DNase I处理并失活后的RNA样品，可直接用于逆转录、qPCR、Northern Blot、RNA-Seq文库构建等多种下游实验，无需额外纯化步骤（视具体实验要求而定）。

四、主要应用场景

五、技术参数

六、使用说明

RNA样品中DNA去除的标准操作流程（以20μL反应体系为例）：

1. 在无RNase的EP管中依次加入：

• RNA样品（1μg）：适量

• Reaction Buffer (10×)：2μL

• DNase I（1U/μL）：1-2μL

• 无RNase水：补至20μL

2. 轻轻混匀，短暂离心收集液体

3. 37℃孵育15-30分钟（具体时间视DNA污染程度而定）

4. 加入EDTA溶液至终浓度2.5-10mM，混匀

5. 65℃加热10分钟使DNase I彻底失活

6. 反应产物可直接用于下游逆转录等实验

注意事项：

• 所有试剂和耗材必须保证无RNase污染

• RNA样品应全程在冰上操作，避免高温导致RNA降解

• 酶的失活必须遵循“先加EDTA、后加热”的顺序，不可颠倒

• DNase I对物理变性敏感，混合时应轻柔颠倒，请勿涡旋震荡

• 酶在使用时应置于冰盒内或冰浴上，使用完毕后立即放回-20℃保存

七、DNase I的失活与抑制

有效失活方法：

• 加入EDTA至终浓度2.5-10mM后，65℃加热10分钟

• 酚-氯仿抽提

抑制作用：

• 金属离子螯合剂（如EDTA、EGTA）

• 毫摩尔级浓度的锌离子（Zn²⁺）

• 0.1% SDS

• DTT、β-巯基乙醇等还原剂

• 50-100mM以上盐浓度

八、储存条件与有效期

• 保存温度：-20℃保存

• 运输条件：干冰或冰袋运输

• 有效期：12-24个月（以包装标签为准）

• 注意事项：如需对酶进行稀释，应使用酶储存溶液（50mM Tris-acetate pH7.5，10mM CaCl₂，50%甘油）进行稀释

九、订购信息

本产品现货供应，提供200U等多种规格，支持批量采购。欢迎各分子生物学实验室、科研院所、医疗机构及生物医药企业来电来函咨询选购。富沃克生物提供专业的技术支持与售后服务，协助您优化实验条件，获得理想的实验结果。

富沃克生物 —— 专注生命科学工具，以高品质工具酶保障RNA实验的纯净与精准。

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