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5×TBE缓冲液是分子生物学实验中常用的核酸电泳缓冲液,其全称为Tris-硼酸-EDTA缓冲液(Tris-Borate-EDTA buffer),主要应用于DNA和RNA的琼脂糖凝胶电泳及聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)。
产品组成与浓度
本产品为5倍浓缩液,稀释至工作浓度后,其核心成分为Tris-硼酸盐和EDTA。以常见的0.5×工作液为例,Tris-硼酸盐浓度为45 mM,EDTA浓度为1 mM。配制1L 5×TBE缓冲液的配方为:54g Tris、27.5g硼酸和20ml 0.5M EDTA(pH8.0)。
产品特点与应用
TBE缓冲液的核心优势在于其缓冲能力强,适合较长时间的电泳,且对小于1kb的核酸片段具有较好的分离效果。它兼容非变性或变性(含7M尿素)凝胶,可用于DNA自动测序等实验。
需要特别注意的是,由于TBE中的硼酸成分会影响DNA回收效率和后续的酶反应(如连接反应等),因此如果实验需要进行DNA片段的凝胶回收或后续酶处理,建议使用TAE缓冲液替代TBE。此外,PAGE电泳推荐使用1×工作液,琼脂糖凝胶电泳可使用0.5×工作液。
使用与保存
使用前,根据实验需要将5×TBE缓冲液用蒸馏水或去离子水稀释至0.5×或1×工作浓度即可。例如,取100ml 5×TBE加入900ml水,即可得到0.5×TBE工作液。
本产品室温保存即可,有效期一般为12至24个月。若在低温环境下保存或久置后出现沉淀析出,属于正常现象,可将其置于37℃水浴中加热并摇晃,使沉淀完全溶解后即可正常使用,不影响产品性能。操作时建议穿着实验服并佩戴一次性手套。
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