做分子生物学实验的小伙伴都知道:辛辛苦苦提完的DNA,用什么溶液来“存”,直接决定了你几周后还能不能P出条带。
纯DNA在水里其实挺“娇气”的。主要有三个“敌人”:
1. 核酸酶(DNase) :到处都有,会直接把DNA“吃掉”【2】
2. 金属离子(尤其是Mg²⁺) :会催化DNA降解【2】
3. pH波动 :酸或碱都会让DNA水解【1】
它的核心作用机制有两方面:
1. Tris-HCl:维持稳定的弱碱性环境(pH 8.0),减少DNA的脱氨反应【1】
2. EDTA:通过螯合Mg²⁺等二价金属离子,使依赖这些离子的DNase失去活性【1】【2】
分子生物学中最常用的DNA储存液就是TE缓冲液——Tris-EDTA缓冲液的简称【1】。标准配方是【2】:
成分 | 终浓度 | 作用 |
Tris-HCl | 10 mM,pH 8.0 | 维持稳定的弱碱性环境,防止DNA酸水解【1】 |
EDTA | 1 mM | 螯合Mg²⁺等金属离子,抑制DNase活性【1】【2】 |
这个配方常被称为 “T10E1”缓冲液【1】。其中Tris负责“稳pH”,EDTA负责“抓金属离子”——一个管环境,一个管“除敌”,配合默契。
方法一:从浓溶液配(最推荐,省事)【6】
步骤 | 操作 |
① | 量取 1 mL 1M Tris-HCl(pH 8.0) |
② | 量取 0.2 mL 0.5M EDTA(pH 8.0) |
③ | 加蒸馏水定容至 100 mL |
④ | 颠倒混匀,建议高压灭菌(121°C,20分钟) 后使用 |
备注:1M Tris-HCl(pH 8.0)和0.5M EDTA(pH 8.0)可自行配制或购买商品化母液【6】。如使用无菌试剂和无菌水在无菌条件下操作,也可不灭菌【6】。
方法二:从粉末配(没有现成母液时)【5】
步骤 | 操作 |
① | 称取 0.121 g Tris碱(即121 mg,Tris碱分子量121.14 g/mol)【5】和 0.0372 g EDTA·Na₂·2H₂O(约37.2 mg,EDTA·Na₂·2H₂O分子量372.24 g/mol)【6】,溶于约80 mL纯水 |
② | 加热搅拌助溶(EDTA在酸性条件下不易溶解,加热和搅拌可加速溶解)【6】 |
③ | 冷却至室温后,滴加浓HCl调pH至 8.0 |
④ | 定容至100 mL,建议高压灭菌(121°C,20分钟) 后使用 |
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参考文献
[1] Wikipedia. TE Buffer
[2] Natural History Museum. TE buffer protocol
[3] 有文献数据显示,TE缓冲液在4°C下可稳定保存DNA数周至数月,-20°C及以下可长期保存
[4] Biomart. 核酸的保存
[5] University of Washington. Stock solutions preparation notes
[6] 广州美基生物. 即用试剂灭菌说明
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