实验干货｜6×Loading Buffer 配制全攻略：让蛋白上样更稳更准

在蛋白质电泳（如SDS-PAGE）实验中，6×Loading Buffer（上样缓冲液）是不可或缺的“隐形助手”，贯穿样品处理至电泳全程，其功能全面且关键，直接影响上样效果与实验结果的稳定性、可靠性，是蛋白电泳实验中必备的核心辅助试剂。

6×Loading Buffer的原理简洁明确、贴合实验需求：其一，促使样品准确定位，其含有的高浓度甘油可显著提高样品密度，使样品加载时能快速沉入凝胶泳道底部，避免样品漂浮、扩散，确保所有样品在同一水平线上开始电泳，减少上样误差；其二，实时追踪电泳进程，添加的溴酚蓝、二甲苯青FF两种指示剂，分子量小、迁移速度稳定，可通过颜色变化直观反映电泳进度，便于实验者判断电泳终止时机，避免因电泳过度或不足导致蛋白条带异常；其三，保护蛋白质完整性，组分中的EDTA可螯合溶液中二价金属离子，抑制蛋白酶活性，有效防止蛋白质在电泳前及电泳过程中发生降解，保障蛋白条带清晰可辨。

此外，6×Loading Buffer需按1:5比例与样品混合使用，其组分浓度经过精准优化，可与电泳缓冲体系适配，不干扰蛋白质的变性与分离，同时能维持样品稳定性，为后续蛋白染色、显影等步骤奠定良好基础。

6×Loading Buffer各组分的核心作用：

1、EDTA：作为金属离子螯合剂，抑制核酸酶等酶类活性，防止蛋白质降解。

2、甘油：提高样品密度，确保样品能沉入凝胶孔道底部，避免漂浮扩散。

3、二甲苯青 FF（Xylene Cyanol FF）与溴酚蓝（Bromophenol Blue）：作为电泳前沿指示剂，通过颜色变化直观反映电泳进程，便于判断终止时机。

4、部分含 SDS 的配方还能使蛋白质变性，进一步提升电泳分离的稳定性。

以下是6×Loading Buffer的配置方法

6×Loading Buffer(500ml).pdf

实验关键注意事项：

1、样品混合比例：上样前需按 1:5 的比例将 Loading Buffer 与样品混合，充分振荡混匀后再上样。

2、沉淀处理：若甘油或蔗糖出现结晶沉淀，可将溶液置于 37℃ 水浴中加热溶解，冷却后再使用。

3、分装保存：建议将配好的溶液分装成 10 ml/管的小份，-20℃ 冻存可长期保持活性，避免反复冻融导致组分失效。

4、操作防护：EDTA 对皮肤和眼睛有刺激性，配制时需佩戴手套、护目镜，若不慎接触，立即用大量清水冲洗。

售后与福利：

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