“蛋白筛网”：30%/40% Acrylamide 储液配制全指南

在 SDS-PAGE实验中，Acrylamide与N,N'-Methylene Bisacrylamide(简称 BIS）的混合储液，是构建凝胶“分子筛”结构的核心原料，更是实现蛋白质按分子量精准分离的基础，被誉为蛋白研究领域不可或缺的“蛋白筛网”。无论是基础的蛋白表达验证、蛋白纯度鉴定，还是复杂的蛋白分子量测定、蛋白互作分析，这款储液都发挥着不可替代的作用，其浓度准确性、组分均一性直接决定了凝胶的质量，进而影响整个电泳实验的成败。

要理解其“蛋白筛网”的核心功能，首先需明确 SDS-PAGE 的分离原理：SDS 作为阴离子去污剂，可使蛋白质变性并结合负电荷，消除蛋白质天然的电荷差异和空间构象差异，让所有蛋白质均以统一的电荷密度比迁移；而聚丙烯酰胺凝胶则作为“筛网”，其内部形成的三维多孔网状结构，会根据蛋白质分子量的大小产生不同的阻滞作用——分子量较大的蛋白质难以穿过细小的凝胶孔径，迁移速度较慢；分子量较小的蛋白质可顺利穿过孔径，迁移速度较快，最终实现不同分子量蛋白质的有效分离。

而聚丙烯酰胺凝胶的“筛网”特性，完全由 Acrylamide 与 BIS 的混合储液决定。其中，Acrylamide 作为单体，在引发剂（如过硫酸铵 APS）和催化剂（如 TEMED）的作用下，会发生自由基聚合反应，形成线性的聚丙烯酰胺长链；BIS 作为交联剂，分子两端均含有可聚合的丙烯酰胺基团，能够将多条线性聚丙烯酰胺链连接起来，形成致密的三维网状结构，其用量直接决定了凝胶的交联度，进而调控凝胶孔径的大小。

值得注意的是，Acrylamide 单体具有强神经毒性，可通过皮肤接触、呼吸道吸入进入人体，且毒性具有累积性，长期或反复接触会对神经系统造成不可逆损伤；而聚合后的聚丙烯酰胺无毒，但市售或自制的储液中可能含有少量未聚合的 Acrylamide 单体，因此无论配制还是使用，都需严格做好防护措施。同时，Acrylamide 溶液对光敏感，易发生自聚合，导致储液浓度降低、出现沉淀，因此配制完成后需过滤去除杂质，置于棕色瓶中 4℃ 避光保存，确保储液的稳定性和使用效果。

以下是30% Acrylamide 储液的配制方法：

30%（WV）Acrylamide 储液 (1L).pdf

以下是40% Acrylamide 储液的配制方法：

40%（WV）Acrylamide 储液 (1L).pdf

安全与使用关键注意事项：

1、严格防护，避免接触：丙烯酰胺具有强神经毒性，可通过皮肤、呼吸道吸收且具有累积性。配制时必须佩戴丁腈手套、护目镜及实验服，操作全程在通风橱内进行，严禁直接接触皮肤。

2、避光保存，防止降解：丙烯酰胺溶液对光敏感，需在棕色瓶中避光保存，4℃条件下可稳定保存 1–2 个月。若溶液出现浑浊或沉淀，表明已发生聚合或污染，需立即丢弃重配。

3、滤除杂质，保障胶质：配制后必须经 0.45 μm 滤膜过滤，以除去未溶解的颗粒杂质，避免影响凝胶孔径的均一性。

4、浓度选择，按需配制：30% 储液是实验室最常用的基础浓度，适合配制 5%–15% 的分离胶；40% 储液则多用于配制 15% 以上的高浓度凝胶，以分离低分子量蛋白质。

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