实验核心试剂｜10×PBST 配制实操宝典：免疫实验的 “万能缓冲液”

在免疫印迹（WB）、免疫组化（IHC）、酶联免疫吸附试验（ELISA）等核心免疫实验中，10×PBST缓冲液是高频必备试剂。它是PBS缓冲液的改良版，通过引入非离子型表面活性剂Tween-20，既保留了PBS稳定的生理缓冲环境，又能有效清除非特异性结合干扰，是保障免疫实验特异性与灵敏度的关键。

10×PBST各核心组分功能明确、协同作用，具体如下：

1. NaCl与KCl：核心作用是维持溶液渗透压平衡，严格模拟生理渗透压，避免抗原、抗体因渗透压失衡发生变性或构象改变，保障其特异性结合活性。其中NaCl为主渗透压调节剂，KCl辅助调节渗透压并轻微促进蛋白溶解。

2. Na₂HPO₄与KH₂PO₄：构成磷酸盐缓冲对，可稳定维持溶液pH在7.4（免疫实验最优反应pH），抵抗实验过程中的pH波动，且不与抗原、抗体及实验用酶发生反应，不干扰后续实验步骤。可选用无水Na₂HPO₄（14.4 g/L）或Na₂HPO₄·12H₂O（29 g/L），需严格控制用量避免浓度偏差。

3. 1%（V/V）Tween-20：非离子型表面活性剂，是10×PBST与传统PBS的核心区别。其作用温和，可通过破坏杂蛋白、游离抗体的疏水结合，清除其非特异性吸附，同时覆盖空白疏水位点减少干扰，且不破坏抗原抗体特异性结合及酶活性，还能轻微增溶难溶性抗原、增强洗涤效果。

以下是10×PBST的配制方法:

10×PBST (1L).pdf

关键注意事项:

1、Tween-20 混匀要点：Tween-20 为表面活性剂，易产生泡沫且不易分散，添加后需充分搅拌至溶液无分层、无泡沫，确保组分均一。

2、pH 精准控制：溶液 pH 是实验成败的关键，需在室温下测定并调节至 7.4，温度变化会导致 pH 偏移，影响后续免疫反应效率。

3、保存与使用规范：灭菌后的 10×PBST 母液在室温下可稳定保存数月，若出现浑浊、沉淀或微生物污染，需立即丢弃重新配制；工作液建议现配现用，避免长期放置导致 Tween-20 失效。

4、试剂替代说明：若使用 Na₂HPO₄・12H₂O 替代无水 Na₂HPO₄，需严格按照 29 g/L 的用量称量，避免因水合盐含水量差异导致缓冲体系浓度偏差。

售后与福利：

添加微信可免费领取试剂(包邮)

手机（同微信）：19850855600