琼脂糖凝胶配制核心技法：助力核酸电泳标尺精准应用

在核酸电泳实验中，Agarose（琼脂糖）凝胶是分离、鉴定DNA/RNA的核心载体，被誉为“核酸电泳标尺”。它通过形成多孔网状结构，依据核酸分子量大小实现精准分离，广泛适配质粒鉴定、基因组DNA片段分离、PCR产物检测等分子生物学实验场景。其配制质量、浓度选择直接决定电泳条带清晰度与分离效果，是核酸实验中不可或缺的关键操作环节。

Agarose凝胶的核心分离原理简洁明确：琼脂糖粉末经加热熔化后，冷却凝固形成三维多孔网状结构，孔径大小与琼脂糖浓度负相关——浓度越低，孔径越大，适合分离大分子核酸；浓度越高，孔径越小，适合分离小分子核酸。实验中可根据目标核酸的分子量，选择适配浓度的琼脂糖，实现高效分离与精准鉴定，同时需严格遵循配制规范，避免影响电泳效果。

以下是Agarose凝胶的配制：

Agarose凝胶配制.pdf

⚠️ 实验关键注意事项：

1.  缓冲液统一：用于电泳的缓冲液与用于制胶的缓冲液必须完全一致，避免因缓冲体系差异导致核酸迁移异常、条带偏移，影响实验结果。

2.  溴乙锭防护：溴乙锭具有强致癌性，配制、使用含溴乙锭的溶液时，必须全程佩戴丁腈手套、实验服，严禁皮肤直接接触；实验结束后，废弃的含溴乙锭溶液及凝胶需按有害废弃物规范处理，不可随意丢弃。

3.  加热规范：加热熔化琼脂糖时，严格控制加热时间，避免暴沸；摇动锥形瓶时需戴防热手套，防止烫伤；未完全熔化的琼脂糖需重新加热，确保无残留颗粒。

4.  凝胶保存：凝胶不立即使用时，用保鲜膜密封好制胶模，置于4℃冰箱保存，一般可稳定保存2～5天；保存期间避免挤压、碰撞凝胶，防止凝胶破损或污染。

5.  浓度选择：根据目标线形DNA的分子量，参考浓度-分辨范围表选择适配浓度，避免浓度过高导致小分子核酸迁移过慢、条带压缩，或浓度过低导致大分子核酸分离不彻底。

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