核酸杂交必备：10 mg/ml 鲑鱼精DNA（Salmon DNA）配制实操指南

在核酸杂交实验中，Salmon DNA（鲑鱼精DNA）是核心的非特异性结合阻断试剂，被誉为“核酸杂交阻断剂”。其核心作用是封闭杂交体系中的非特异性结合位点，减少探针与非目标核酸的非特异性结合，降低实验背景，显著提升核酸杂交的特异性与灵敏度，广泛适配Southern blot、Northern blot、原位杂交等各类核酸杂交实验场景。其配制质量、纯度及处理方式，直接决定杂交实验的成败，是分子生物学实验中核酸杂交相关研究的必备试剂。

Salmon DNA之所以能作为理想的阻断试剂，核心优势在于其来源广泛、纯度易控制，且与大多数物种的核酸序列无特异性同源性，不会与目标核酸探针发生特异性结合。实验中，Salmon DNA经变性处理后，可优先结合杂交膜、载玻片或反应体系中的空白核酸结合位点，形成“保护膜”，从而阻止探针非特异性吸附，避免假阳性信号产生，同时不影响探针与目标核酸的特异性杂交反应，为实验结果的准确性提供保障。

10 mg/ml Salmon DNA（约100 ml 装）精准配方如下:

10 mgml Salmon DNA（约100 ml 装）精准配方.pdf

⚠️ 实验关键注意事项:

1.  核酸酶防护：Salmon DNA易被核酸酶降解，所有与DNA接触的实验用品（烧杯、移液管、离心管等）需提前高压灭菌，避免核酸酶污染；配制过程中全程保持无菌操作，防止微生物滋生产生核酸酶。

2.  分装保存规范：长期反复冻融会导致DNA断裂或降解，严重影响阻断效果，因此配制完成后务必小份分装（1 ml/份），-20℃密封保存；取用后立即放回冰箱，避免室温放置过久，严禁反复冻融同一份溶液。

3.  溶解与纯化要求：溶解Salmon DNA时，需用TE Buffer，室温搅拌足够时间（2～4小时），确保完全溶解；若溶液始终浑浊，说明含有杂质或未完全溶解，可延长搅拌时间，或在低于60℃的条件下温和加热辅助溶解，溶解完成后务必过滤去除杂质，避免影响DNA纯度。

4.  抽提操作规范：苯酚、苯酚/氯仿具有腐蚀性和毒性，抽提过程中需佩戴手套、护目镜，在通风橱内操作；颠倒混匀时动作要轻柔，避免剧烈摇晃导致DNA断裂，同时确保充分分层，准确收集水相DNA溶液，避免混入有机相杂质。

5.  使用前变性处理：Salmon DNA需经变性（沸水浴加热+快速冰浴）形成单链后，才能发挥阻断作用，未变性的双链DNA阻断效果极差；变性后需立即使用，避免单链DNA复性，影响实验效果。

6.  浓度精准控制：最终DNA浓度需精准调节至10 mg/ml，浓度过高会导致杂交背景偏高，浓度过低则无法有效封闭非特异性位点；测定OD260值时，需将DNA溶液适当稀释，确保OD值在0.1～1.0之间，提高浓度计算的准确性。

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