核酸分离的 “孔径法则”：琼脂糖凝胶浓度与线性 DNA 分辨率的精准匹配指南

在分子克隆、PCR 产物鉴定、核酸片段回收等核心实验中，琼脂糖凝胶电泳是分离、分析线性 DNA 片段的金标准技术。其分离核心在于凝胶孔径对不同分子量 DNA 的筛分效应，而琼脂糖浓度正是决定孔径大小的关键变量 —— 浓度每调整 0.1%，都可能直接影响目标片段的分离清晰度与实验效率。本文结合经典的浓度 - 分辨率对应表，系统解析琼脂糖凝胶的筛分原理、浓度选型逻辑及实操优化策略，助力实验人员快速锁定最佳分离方案，实现核酸片段的精准分离。

琼脂糖是从海藻中提取的线性多糖，溶于热缓冲液后冷却会形成三维网状凝胶基质，其孔径大小与琼脂糖浓度呈负相关：浓度越低，多糖链交联越疏松，凝胶孔径越大，允许大分子量 DNA 片段快速通过，小分子量片段则易发生扩散；浓度越高，多糖链交联越紧密，凝胶孔径越小，能阻滞小分子量 DNA 片段的迁移，实现精细分离，但大分子量片段会被严重阻滞，甚至无法穿透凝胶。

对于线性 DNA（如 PCR 产物、质粒酶切片段），其迁移速率遵循 “分子量越小，迁移越快” 的规律，而琼脂糖浓度通过调控孔径，为不同长度的线性 DNA 划定了 “最佳分离区间”—— 只有当凝胶浓度与目标片段长度匹配时，才能实现条带清晰、无拖尾、分辨率最大化的分离效果。

下表是分子生物学实验中验证的经典浓度 - 分辨率数据，覆盖了从 50 bp 小片段到 30,000 bp 大片段的全范围分离需求：

琼脂糖凝胶浓度与线性DNA最佳分辨率对应表.pdf

琼脂糖凝胶浓度是决定线性 DNA 分离分辨率的 “核心旋钮”，其与 DNA 片段长度的匹配关系直接决定实验成败。实验人员只需牢记 “低浓分大片、高浓分小片、1.0% 为通用” 的核心逻辑，结合浓度 - 分辨率对应表与实验场景化选型指南，即可快速锁定最佳凝胶浓度。在实际操作中，通过精准控制凝胶制备细节、灵活调整浓度参数，可有效规避条带扩散、拖尾等问题，实现线性 DNA 片段的高效、精准分离，为后续克隆、测序、回收等实验奠定坚实基础。

售后与福利：

添加微信可免费领取试剂(包邮)

手机（同微信）：19850855600