蛋白分子量的 “精准筛网”：SDS-PAGE 分离胶的配制与应用指南

在 SDS-PAGE 电泳体系中，分离胶是实现蛋白质按分子量精准分离的核心 “筛网”。它通过不同浓度的凝胶孔径与 SDS 的电荷均一化作用，让蛋白质分子在电场中实现高效分离，其配制质量直接决定了电泳条带的分辨率与实验结果的可靠性。本文结合多浓度配方表，系统解析分离胶的原理、配制要点与实操技巧，助力实验人员打造适配不同分子量范围的精准分离体系。

分离胶的核心作用与原理：

分离胶的核心作用是按分子量筛分蛋白质：

• 1、分子筛效应：不同浓度的分离胶具有不同孔径，小分子量蛋白更容易穿过凝胶孔隙，大分子量蛋白则被阻滞，从而实现分离。

• 2、电荷均一化：SDS 使蛋白质变性并结合负电荷，消除天然电荷与构象差异，确保蛋白仅按分子量大小迁移。

• 分离胶的分离效应源于不连续缓冲体系与分子筛效应的协同作用：

• 1、高pH缓冲环境：1.5 M Tris-HCl（pH 8.8）构建稳定的高 pH 环境，使蛋白质在电泳中保持恒定的负电荷。

• 2、凝胶孔径梯度：6%-15% 的凝胶浓度对应不同孔径，浓度越高，孔径越小，越适合分离小分子量蛋白；浓度越低，孔径越大，适合分离大分子量蛋白。

多浓度分离胶精准配方表如下：

SDS-PAGE分离胶配方表.pdf

常见问题与解决方案：

• 凝胶聚合过慢：APS 或 TEMED 失效，需更换新鲜试剂；环境温度过低，可置于 37℃加速聚合。

• 条带模糊：凝胶浓度选择不当，需根据目标蛋白分子量调整浓度；SDS 浓度不足，需核对添加量。

• 气泡残留：灌胶时倾斜胶板，缓慢倒入溶液；若产生气泡，可用针头刺破。

售后与福利：

添加微信可免费领取试剂(包邮)

手机（同微信）：19850855600