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琼脂粉，学名琼胶（Agar），是从石花菜、江蓠菜等红藻中提取的天然多糖。它的本职工作是给液体培养基当“凝固剂”——液体培养基加了它，加热溶解、冷却后就变成了固体平板，细菌才能在表面“安家落户”。[1]
核心身份：琼脂本身不被绝大多数微生物利用，对微生物来说是“惰性”的，所以它只负责搭架子，不干扰细菌生长。
指标 | 参数 | 说明 |
CAS号 | 9002-18-0 | 唯一的“身份证号” |
外观 | 类白色至淡黄色粉末 | 纯度高则色泽浅 |
凝胶强度 | 800~1200 g/cm²（1.5%浓度） | 强度越高，用量越省 |
凝胶温度 | 32~39℃（1.5%浓度） | 低于此温度开始凝固 |
熔点 | 85~95℃ | 需高温加热才能溶解 |
pH适用范围 | 中性（5.0~7.0） | pH＜4时无法凝固 |
有效期 | 2~5年 | 室温干燥避光保存 |
常规用量 | 1.5%~2.0%（即15~20 g/L）[2] | 组培可降至0.7%左右 |
1、称量 + 冷水分散：
（1）按配方称取琼脂粉和培养基其他成分（蛋白胨、牛肉膏、NaCl等）
（2）将琼脂粉先与少量冷水混合，搅拌至分散均匀无团块
（3）再加入剩余蒸馏水至目标体积
2、加热煮沸至完全溶解
（1）将分散好的琼脂悬浊液加热，煮沸并持续搅拌
（2）煮至琼脂完全溶解，溶液澄清透明，无肉眼可见颗粒为止
（3）灭菌前应确保琼脂已完全溶解并分散均匀，再进行分装
3、灭菌
（1）将溶解好的培养基分装至锥形瓶（不超过容积的1/2，防止灭菌时喷出）
（2）贴好标签（名称、日期、配制人）
（3）121℃高压蒸汽灭菌15分钟 [3]
4、冷却 + 倒平板
（1）灭菌结束后，将培养基冷却至50~55℃左右
（2）如需添加抗生素、维生素等热不稳定成分，在50℃左右时加入并摇匀 [3]
（3）在酒精灯火焰旁，将培养基倒入无菌培养皿（约15~20 mL/皿）
（4）静置30~60分钟至完全凝固
问题现象 | 可能原因 | 解决办法 |
培养基不凝固 | pH＜4 | 调pH至中性再灭菌 |
培养基不凝固 | 琼脂用量不够 | 增加至1.5%~2.0% |
平板太软 | 灭菌时间过长 | 121℃不超过15~20分钟 |
倒板后有水珠 | 冷凝水未处理 | 倒完平板超净台吹干15分钟 |
平板有颗粒 | 琼脂没煮化 | 必须加热至完全溶解 |
凝胶强度是琼脂粉最核心的参数，直接决定了你用多少量：
凝胶强度 | 推荐用量 | 适用场景 |
800~900 g/cm² | 1.8%~2.0% | 常规微生物分离培养 |
900~1100 g/cm² | 1.5%~1.8% | 细菌平板、组培基础 |
1100~1200 g/cm² | 1.2%~1.5% | 植物组培、高要求实验 |
实验人小贴士：强度越高，同样的用量凝固越结实。植物组培通常需要更高强度的琼脂粉，因为培养基要支撑植物组织站立。
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[1] 西宝生物科技（上海）股份有限公司. 搭建细菌培养温床的‘混凝土和复合肥’——琼脂粉探秘 . 2024.
[2] Flinn Scientific. Pouring Agar Plates [实验指南]. www.flinnsci.com.
[3] 沈萍, 陈向东. 微生物学实验（第5版）[M]. 北京: 高等教育出版社, 2018.
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