Tris-HCl平衡苯酚 – 核酸抽提用平衡酚

Tris-HCl平衡苯酚 – 核酸抽提用平衡酚

用途说明
用于DNA/RNA抽提中去除蛋白质，平衡至pH8.0的苯酚可有效避免核酸在酸性条件下分配至有机相，提高核酸回收率。

配制方法

1. 原料要求：避免使用粉红/黄色液化苯酚及未重蒸结晶苯酚。结晶苯酚需160℃重蒸以去除醌类氧化产物（否则会导致核酸降解或交联），建议直接选用分子生物学级苯酚。

2. 苯酚融解：-20℃保存的结晶苯酚取出后室温复温，再于68℃水浴中融解。

3. 加入羟基喹啉：加羟基喹啉至终浓度0.1%（w/v）。其作用包括：①抗氧化还原剂；②弱抑制RNA酶；③螯合金属离子；④水相呈黄色，便于肉眼辨别界面。

4. Tris-HCl平衡操作：

• 第一轮：加入等体积1 M Tris-HCl（pH8.0），磁力搅拌15分钟，静置分层后弃去上层水相，重复一次；

• 第二轮：加入等体积0.1 M Tris-HCl（pH8.0），磁力搅拌15分钟，静置分层后弃去上层水相（可残留少量水相覆盖有机相，防止氧化）。

5. pH验证：用pH试纸检测有机相pH值，须≥7.8。酸性条件下DNA易分配至有机相，导致严重损失。

6. 保存：转移至棕色瓶中，4℃避光密封保存。若上覆水相变黄或有机相变粉红色，提示氧化，需重新配制。

关键操作要点

• 强腐蚀性安全防护：苯酚腐蚀性极强，可造成严重化学灼伤，操作全程须戴手套、防护眼镜，并在通风橱内进行。

• 皮肤接触处理：若皮肤不慎接触苯酚，应立即用大量清水冲洗，后用肥皂和水清洗，忌用乙醇（乙醇会促进苯酚经皮肤吸收，加重损伤）。

• pH为关键质控指标：平衡后务必确认有机相pH≥7.8，否则需重复平衡，确保核酸回收效率。

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