TE缓冲液 – Tris-EDTA缓冲液（100ml 配制）

TE缓冲液 – Tris-EDTA缓冲液（100ml 配制）

用途说明
用于DNA和RNA的溶解、稀释及长期保存。EDTA通过螯合金属离子抑制金属依赖性核酸酶（DNase/RNase），Tris维持稳定的弱碱性pH环境（8.0），是核酸储存中最常用的基础缓冲液。

工作液组分浓度

• 10 mM Tris-HCl（pH 8.0）

• 1 mM EDTA

配制方法（100ml 体系）

1. 方法一（固体Tris碱）：称取0.121 g Tris碱，加入约80 ml去离子水搅拌溶解。

2. 方法二（Tris储备液）：量取1 ml 1M Tris-HCl（pH 8.0）储备液，加入约80 ml去离子水。

3. 量取0.2 ml 0.5M EDTA（pH 8.0）储备液，加入上述溶液中，混匀。

4. 若使用Tris碱，用浓HCl调节pH至8.0（EDTA在pH低于8.0时难溶解，调至8.0后溶液应完全澄清）。

5. 用去离子水定容至100 ml，充分混匀。

6. 灭菌：121℃高压灭菌20分钟，或使用0.22 μm滤膜过滤除菌。

7. 室温或4℃密封保存。

关键操作要点

• EDTA溶解依赖pH：EDTA二钠盐仅在pH接近8.0时完全溶解。配制时若溶液浑浊，通常为pH偏低，调高pH至8.0即可变澄清。

• DNA与RNA用途区分：

• 用于保存DNA：建议高压灭菌以彻底灭活DNase。

• 用于重溶RNA：必须使用DEPC处理水配制，并采用过滤除菌（避免高压灭菌导致DEPC降解产生潜在致癌物）。

• 灭菌后若出现沉淀，可37℃水浴复溶后使用。