10×MOPS Buffer – RNA甲醛变性电泳缓冲液（1L 配制）

10×MOPS Buffer – RNA甲醛变性电泳缓冲液（1L 配制）

用途说明
用于RNA甲醛变性琼脂糖凝胶电泳，是Northern blot及RNA质量检测的核心缓冲液。MOPS缓冲体系可在变性条件下维持RNA单链状态，确保电泳分离的准确性。

工作液组分浓度（10×）

• 200 mM MOPS

• 20 mM NaOAc

• 10 mM EDTA

配制方法（1L 体系）

1. 称取41.8 g MOPS，置于1L烧杯中。

2. 加入约700 ml DEPC处理水，搅拌至完全溶解。

3. 使用2N NaOH调节pH至7.0（室温下测定）。

4. 加入20 ml 1M NaOAc（DEPC处理水配制）和20 ml 0.5M EDTA（pH8.0）（DEPC处理水配制），充分混匀。

5. 用DEPC处理水定容至1L。

6. 使用0.45μm滤膜过滤除去杂质，转移至棕色瓶中。

7. 室温避光保存。

关键操作要点

• 光敏感性：MOPS对光敏感，长期光照会分解变黄，必须使用棕色瓶或铝箔包裹避光保存。若溶液变为深黄色或棕色，说明MOPS已降解，不可使用，需重新配制。

• RNase防控：所有配制用水及添加的储备液均须使用DEPC处理水，容器及器具需经DEPC处理或干热灭菌以去除RNase污染。

• 过滤除菌：本溶液不可高压灭菌，须使用0.45μm滤膜过滤除菌。

• 使用方法：电泳时稀释为1×工作液（如100ml 10×MOPS + 900ml DEPC水），并加入甲醛使终浓度为2.2M。