琼脂糖凝胶 – 核酸电泳用凝胶配制

琼脂糖凝胶 – 核酸电泳用凝胶配制

用途说明
用于DNA片段的琼脂糖凝胶电泳分离、检测及回收，是分子生物学中最基础的核酸分析手段。

配制方法与操作流程

1. 缓冲液准备：配制适量电泳及制胶用缓冲液（常用0.5×TBE或1×TAE）。制胶与电泳必须使用同一缓冲液。

2. 称量琼脂糖：根据制胶量及目标凝胶浓度，准确称取琼脂糖粉，置于合适的锥形瓶中。

3. 加缓冲液：加入计算好的电泳缓冲液量（总液体量不应超过锥形瓶容积的50%，以防沸腾溢出）。

4. 微波炉加热熔化：

• 瓶口封保鲜膜并扎数个小孔（防止爆沸及水分过度蒸发）。

• 微波炉加热至沸腾后取出，戴防热手套小心摇匀，重复数次至琼脂糖完全熔化、无透明颗粒。

• 关键：每次沸腾即停，避免过热暴沸导致浓度不准及微波炉污染；必须完全熔化，否则电泳条带模糊。

5. 冷却与加染料：溶液自然冷却至约60℃（手触瓶壁不烫为宜），如需加入溴乙锭（EB）至终浓度0.5μg/ml，充分混匀。（溴乙锭为强致癌物，操作须戴手套）

6. 制胶：将琼脂糖溶液倒入制胶模具，插入合适齿数的梳子，凝胶厚度通常3～5mm。

7. 凝固与电泳：室温静置约30分钟～1小时至完全凝固，小心拔出梳子，将凝胶置入电泳槽中，加入缓冲液没过凝胶即可上样电泳。

琼脂糖凝胶浓度与线形DNA最佳分辨范围

关键操作要点

• 缓冲液统一：制胶与电泳必须使用同一批次、同一浓度的缓冲液，否则会导致电泳时离子强度不一致，条带扭曲。

• 未使用凝胶保存：凝胶若不立即使用，应以保鲜膜包好，4℃保存，一般可存放2～5天（避免干燥及污染）。

• EB安全操作：含EB的凝胶及缓冲液均按致癌物废弃物处理，操作全程戴双层手套，专用器具。