6×Loading Buffer – 核酸电泳上样缓冲液（500ml 配制）

6×Loading Buffer – 核酸电泳上样缓冲液（500ml 配制）

用途说明
用于DNA/RNA琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳的样品上样。溴酚蓝和二甲苯青FF作为电泳指示剂，分别对应于不同分子量的核酸片段迁移位置，便于电泳进程的目视判断和及时终止。

工作液组分浓度（6×）

• 30 mM EDTA

• 36%（V/V）甘油

• 0.05%（W/V）溴酚蓝

• 0.05%（W/V）二甲苯青FF

配制方法（500ml 体系）

1. 称取4.4 g EDTA、250 mg 溴酚蓝、250 mg 二甲苯青FF，置于500ml烧杯中。

2. 加入约200ml去离子水，加热并搅拌至完全溶解。

3. 加入180ml甘油，充分搅拌均匀。

4. 使用2N NaOH调节pH至7.0。

5. 用去离子水定容至500ml，充分混匀后室温保存。

关键操作要点

• 使用比例：上样时按1:5比例与核酸样品混合（如2μl 6×Loading Buffer + 10μl DNA样品），充分混匀后上样。

• 低温结晶处理：若甘油或蔗糖出现结晶沉淀，于37℃水浴加热并摇匀即可复溶，不影响使用效果。

• 指示剂迁移参照：在1%琼脂糖凝胶中，溴酚蓝约对应300bp DNA片段，二甲苯青FF约对应4kb DNA片段，便于粗估样品迁移位置。