10×Loading Buffer – RNA电泳上样缓冲液（10ml 配制）

10×Loading Buffer – RNA电泳上样缓冲液（10ml 配制）

用途说明
专用于RNA甲醛变性凝胶电泳及聚丙烯酰胺凝胶电泳的样品上样。溴酚蓝和二甲苯青FF作为电泳指示剂，甘油增加样品密度使样品沉入加样孔底部，EDTA螯合金属离子抑制RNase活性。

工作液组分浓度（10×）

• 10 mM EDTA

• 50%（V/V）甘油

• 0.25%（W/V）溴酚蓝

• 0.25%（W/V）二甲苯青FF

配制方法（10ml 体系）

1. 量取200μl 0.5M EDTA（pH8.0），称取25mg溴酚蓝、25mg二甲苯青FF，置于10ml离心管中。

2. 加入约4ml DEPC处理水，充分搅拌至完全溶解。

3. 加入5ml甘油，充分混匀。

4. 用DEPC处理水定容至10ml，颠倒混匀。

5. 室温保存。

关键操作要点

• RNase防控：RNA极易降解，配制用水必须使用DEPC处理水，所有接触的离心管、枪头、容器均需无RNase（经DEPC处理或购买RNase-free耗材）。

• 使用比例：上样时按1:10比例与RNA样品混合（如1μl 10×Loading Buffer + 9μl RNA样品），充分混匀后上样。

• 指示剂参照：在1%琼脂糖凝胶中，溴酚蓝约对应300bp，二甲苯青FF约对应4kb，便于电泳进程判断。