TB/Amp/X-Gal/IPTG平板 – 高密度蓝白斑筛选琼脂平板（1L 配制）

TB/Amp/X-Gal/IPTG平板 – 高密度蓝白斑筛选琼脂平板（1L 配制）

产品用途

TB/Amp/X-Gal/IPTG平板是基于高密度TB培养基（Terrific Broth）的蓝白斑筛选琼脂平板，用于氨苄抗性质粒转化子的高密度蓝白斑筛选和重组子鉴定。与LB蓝白斑平板相比，TB平板含有更高浓度的胰蛋白胨（1.2% vs 1%）和酵母提取物（2.4% vs 0.5%），甘油作为碳源，磷酸盐缓冲体系维持pH稳定，支持转化后菌株达到更高的菌体密度，可显著提高转化子数量，特别适合转化效率较低、需要筛选大量克隆、以及高密度培养条件下的蓝白斑筛选实验。本产品兼具蓝白斑筛选功能和高密度培养优势，是cDNA文库构建、噬菌体文库筛选、大规模克隆筛选等实验的理想选择。

核心组分及终浓度

• 1.2%（W/V）Tryptone（胰蛋白胨） – 提供氮源、氨基酸和肽类

• 2.4%（W/V）Yeast Extract（酵母提取物） – 提供维生素、生长因子和核苷酸

• 0.4%（V/V）Glycerol（甘油） – 碳源和能量来源

• 17mM KH₂PO₄（磷酸二氢钾） – 缓冲体系酸性组分

• 72mM K₂HPO₄（磷酸氢二钾） – 缓冲体系碱性组分

• 0.1mg/ml Ampicillin（氨苄青霉素） – 抗性筛选压力

• 0.024mg/ml IPTG（异丙基-β-D-硫代半乳糖苷） – lac启动子诱导剂

• 0.04mg/ml X-Gal（5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷） – β-半乳糖苷酶显色底物

• 1.5%（W/V）Agar（琼脂） – 培养基凝固剂

配制方法（1L 体系）

第一步：配制磷酸盐缓冲液（100ml）

1. 称取 2.31g KH₂PO₄ 和 12.54g K₂HPO₄，溶于约90ml去离子水中。

2. 充分搅拌至完全溶解后，加去离子水定容至 100ml。

3. 高温高压灭菌（121℃，20min），备用。

第二步：配制基础培养基

1. 称取以下各组分，置于1L烧杯中：

• 12g Tryptone

• 24g Yeast Extract

• 4ml Glycerol（甘油粘稠，沿烧杯壁缓慢滴加）

2. 加入约 800ml 去离子水，磁力搅拌至完全溶解。

3. 加去离子水定容至 1L，充分混匀。

4. 加入 15g Agar，混匀。

5. 高温高压灭菌（121℃，20min）。

6. 灭菌后冷却至 60℃（水浴或室温自然冷却）。

第三步：添加磷酸盐缓冲液和筛选试剂

1. 在超净台内无菌操作，依次加入以下组分并充分混匀：

• 100ml 灭菌磷酸盐缓冲液

• 1ml Ampicillin（100mg/ml）

• 1ml IPTG（24mg/ml）

• 2ml X-Gal（20mg/ml）

2. 加药后快速摇匀，避免局部浓度过高。

第四步：铺制平板

1. 培养皿提前紫外线消毒30分钟以上。

2. 将培养基倒入无菌90mm培养皿中，30～35ml/皿。

3. 室温静置至完全凝固（约30分钟），除尽气泡。

4. 平板凝固后倒置存放。

5. 4℃避光密封保存。

各组分功能详解

使用方法

• 涂布转化产物：将转化后的菌液涂布于平板上，37℃倒置培养12～16小时。

• 结果判读：

• 蓝色菌落 – 空载体或非重组质粒（无外源片段插入，lacZα完整）

• 白色菌落 – 重组阳性克隆（外源片段插入破坏lacZα）

• 后续分析：挑取白色菌落接种于TB/Amp液体培养基中进行质粒扩增或蛋白表达，TB培养基的高营养特性可提供更多菌体和质粒产量。

• 高密度培养优势：TB平板支持转化后菌落生长更健壮，蓝色显色更清晰，尤其适合需要筛选大量克隆的文库构建实验。

LB蓝白斑平板与TB蓝白斑平板对比

关键操作要点

• 磷酸盐缓冲液单独灭菌（最重要）：磷酸盐缓冲液必须单独配制灭菌，待基础培养基冷却至60℃后加入。磷酸盐与培养基其他组分不可混合灭菌，防止高温下发生反应。

• X-Gal全程避光（最重要）：X-Gal为光敏试剂，添加剂需在-20℃储存，X-Gal称量、溶解、分装、添加及平板保存全程须避光操作。

• 冷却至60℃再加药（重要）：Ampicillin、IPTG和X-Gal均不耐高温，必须待培养基冷却至60℃后再无菌添加，使用无菌移液管，防交叉污染。仅在此温度下添加，避免活性丧失。

• pH调节注意：若需调节pH，5N NaOH具强腐蚀性，需戴手套、护目镜，逐滴慢加并搅拌，pH计校准后再测，微调至所需值。

• 倒置保存：平板凝固后必须倒置存放，严防冷凝水污染。

• 4℃避光密封：平板应4℃避光密封保存，尽快使用（建议1～2周内），防污染及X-Gal失效。

常见问题排查

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