辛辛苦苦配的PCR跑不出来？问题可能出在水上

做过分子实验的同学都懂——引物对了、酶没问题、程序也没设错，可PCR就是扩不出来，条带模糊、空白对照出了阳性、重复性时好时坏。排查了一圈，最后发现是水出了问题。

实验室里的水看起来都一样透明，但纯度的差别可太大了。自来水里有离子、有机物、微生物；蒸馏水做普通化学实验还行；可到了PCR、酶切、RNA实验这种“高要求”场景，水里残留的微量离子或核酸酶足以让你的实验前功尽弃。那到底该用什么水？ddH₂O又是怎么来的？

一、ddH₂O是什么？

ddH₂O，全称double distilled water，中文叫双蒸水。说白了就是蒸馏了两次的水。

第一次蒸馏能去掉大部分无机盐和不挥发杂质，但水中的挥发性组分（比如氨、二氧化碳、有机物）还会跟着蒸汽跑进水里。再蒸一次，就能把这些残留的挥发性杂质进一步甩掉。两次蒸馏下来，水里的无机盐、有机物、微生物、可溶解气体和挥发性杂质含量都降到了极低的水平。

在实验室用水的纯度序列里，ddH₂O的纯度高于普通蒸馏水和纯水（RO水），其电导率通常低于一次蒸馏水。而经过离子交换等多步纯化的超纯水（25℃时电阻率18.2 MΩ·cm）纯度则高于ddH₂O。[1][2]

二、不同类型实验用水对比[3][4]

注：RNA相关实验必须使用DEPC处理水（RNase-free ddH₂O），普通双蒸水不适合用于RNA实验。

三、ddH₂O怎么制备？

常规双蒸水制备步骤：

1. 一次蒸馏：将纯水或去离子水加入蒸馏装置，加热蒸馏，收集蒸馏出的冷凝水。建议弃去最初约10%-20%的馏出液，以去除挥发性杂质和系统残留物。

2. 二次蒸馏：将第一次收集的蒸馏水再次加入蒸馏装置，进行第二次蒸馏，同样建议弃去初馏液，收集中段馏分即得ddH₂O。

3. 灭菌（可选） ：如需无菌水，可将ddH₂O装入耐高压容器，121℃高压灭菌15-20分钟。灭菌后的ddH₂O称为无菌双蒸水。

关于DEPC处理水

RNA实验需使用DEPC处理水（RNase-free ddH₂O），制备方法为：在ddH₂O中加入0.1%（体积比）DEPC（焦碳酸二乙酯） ，剧烈振荡后室温静置过夜（或数小时），再经121℃高压灭菌15-20分钟去除残留DEPC[3]。

关键提醒：

l DEPC为潜在致癌物，操作需在通风橱中进行并佩戴手套。

l 含有Tris的缓冲液不能用DEPC处理——DEPC会与Tris反应生成氨基甲酸酯。

l DEPC处理后必须彻底高压灭菌去除残留，否则残留物会抑制酶反应。

l 灭菌后的DEPC处理水建议分装保存，避免反复开启引入污染。

四、商业化便捷选择——杭州富沃克生物

自己制备ddH₂O虽然原理简单，但蒸馏设备贵、耗时长、水质稳定性难以保证。如果追求省心省力，可以直接选择成熟的商业化产品。

杭州富沃克生物科技有限公司

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参考文献

[1] 双蒸水[EB/OL]. 百度百科, 2025-09-18.

[2] 双蒸水(ddwater)[EB/OL]. 美仑生物. https://www.meilunbio.com（产品货号PWL070）

[3] DEPC水和DEPC处理水的区别[EB/OL]. 索莱宝生物, 2015-08-19.

[4] 实验用水有哪几种？有什么区别？[EB/OL]. AnyTesting, 2026-06-17.