缓冲液pH总调不准？磷酸氢二钠到底怎么配才靠谱？

做蛋白纯化、细胞培养的同学都懂——缓冲液pH死活调不到目标值，细胞培养基偏酸偏碱养不活，色谱峰形歪歪扭扭。你换了pH计、查了操作、调了比例，最后发现是磷酸氢二钠本身配错了。1M磷酸氢二钠是磷酸盐缓冲液（PBS）最核心的储备液之一——细胞培养、蛋白纯化、核酸电泳、免疫检测，处处都有它的身影。浓度不对、水合物搞混，实验直接报废。那1M磷酸氢二钠溶液到底是什么？怎么配才靠谱？

一、1M磷酸氢二钠溶液是什么？

磷酸氢二钠（Disodium Hydrogen Phosphate），化学式Na₂HPO₄，是磷酸生成的钠盐酸式盐之一【1】。它易溶于水，水溶液呈弱碱性【1】。实验室常见的形态有三种【2】【3】：

磷酸氢二钠在空气中易风化【1】，常温放置会失去结晶水，称量前需确认试剂状态。

二、配方成分与表格

1M磷酸氢二钠贮液的标准配方如下【1】【5】：

⚠️ 不同水合物形态称量不同，不可混用【1】。购买时务必看清试剂标签！

三、配制步骤（以配制1 L 1M磷酸氢二钠贮液为例）【5】

1. 确认试剂形态：检查试剂瓶标签，确认是无水物、二水合物还是十二水合物【5】。

2. 计算称量：

无水物（Na₂HPO₄）：称取142 g

二水合物（Na₂HPO₄·2H₂O）：称取约178 g

十二水合物（Na₂HPO₄·12H₂O）：称取约358 g

3. 溶解：加入约800 mL去离子水（或蒸馏水）【5】，搅拌至完全溶解。

4. 定容：加去离子水定容至1 L，充分混匀。建议在室温（20-25℃）下定容——高浓度盐溶液在高温下定容后冷却会导致体积收缩，使实际浓度偏高。

5. 保存：室温保存【5】。

四、如何用1M磷酸氢二钠配制特定pH的磷酸盐缓冲液？

磷酸盐缓冲液（PB）通常由磷酸二氢钠（酸性） 和磷酸氢二钠（碱性） 两种贮液混合配制【4】【5】。配制方法如下【5】：

1. 先配制两种1M贮液【5】：

1M磷酸二氢钠（NaH₂PO₄·H₂O） ：称取138 g定容至1 L

1M磷酸氢二钠（Na₂HPO₄） ：称取142 g定容至1 L

2. 按下表比例混合两种贮液，加水稀释至目标浓度【5】：

上表为1M贮液混合比例，使用前稀释至所需工作浓度（如10 mM、50 mM、100 mM等）。

⚠️ 关键提醒【1】【3】【5】：

l 注意区分水合物形态【1】——无水物（141.96）、二水合物（177.99）、十二水合物（358.14）分子量不同，称量不可混用。购买时务必看清试剂标签！

l 磷酸氢二钠易风化【1】——在空气中会失去结晶水，称量前确认试剂状态，如有结块建议干燥后使用。

l pH值随温度变化【3】——磷酸盐缓冲液的pH受温度影响，配制和校准建议在目标使用温度下进行。

l 过滤除菌（如需无菌） ：可用0.22 μm滤膜过滤除菌【5】。若采用高压灭菌（121℃，15-20分钟） ，灭菌后需重新校准pH。

l 室温保存：配制好的1M贮液室温即可保存【5】。

五、商业化便捷选择——杭州富沃克生物

自己配制磷酸氢二钠溶液虽然步骤清晰，但磷酸氢二钠存在无水、二水、十二水三种形态，分子量各不相同，一旦搞混整瓶报废。如果追求省心省力，可以直接选择成熟的商业化产品。

杭州富沃克生物科技有限公司推出的1M磷酸氢二钠溶液，采用高纯度试剂原料精准配制，浓度准确、即开即用，省去自行配制的繁琐与批次波动风险。适用于磷酸盐缓冲液配制、细胞培养基、蛋白纯化等多种生物实验场景。

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官网链接：弱酸性酶学实验缓冲试剂 0.1M 磷酸二氢钠溶液 科研试验用 pH 精准无机试剂-杭州富沃克生物科技有限公司

参考文献

[1] 磷酸氢二钠[EB/OL]. 百度百科, 2022-08-19. https://baike.baidu.com/item/磷酸氢二钠

[2] 磷酸一氢钠[EB/OL]. 维基百科. https://zh.wikipedia.org/wiki/磷酸一氢钠

[3] USP Monographs: Dibasic Sodium Phosphate[EB/OL]. USP. http://ftp.uspbpep.com/v29240/usp29nf24s0_m77027.html

[4] 索莱宝. pH9.0磷酸盐-生理盐水缓冲液（LA1790）产品说明[EB/OL]. http://www.solarbio-hd.com

[5] 磷酸缓冲液配置[EB/OL]. 江苏科伦多食品配料有限公司. http://www.kolodjs.com/m/news/219.html