碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液全攻略：ELISA包被的pH 9.6是怎么来的？

做ELISA的同学都懂——抗体包被效率低、背景值高得离谱、重复性时好时坏。你换了抗原、调了封闭、检查了酶标板，最后发现是包被缓冲液的pH根本不准。碳酸钠-碳酸氢钠缓冲溶液是ELISA、蛋白包被、免疫检测中最常用的包被缓冲液之一，pH不对，抗体根本贴不到板子上。那碳酸钠-碳酸氢钠缓冲溶液到底是什么？怎么配才靠谱？

一、碳酸钠-碳酸氢钠缓冲溶液是什么？

碳酸钠-碳酸氢钠缓冲溶液（Sodium Carbonate-Bicarbonate Buffer，常缩写为CBS）是一种由碳酸钠（Na₂CO₃） 和碳酸氢钠（NaHCO₃） 组成的缓冲体系【1】。它利用弱酸（HCO₃⁻）及其共轭碱（CO₃²⁻）构成的缓冲对来抵抗pH变化——当加入少量酸时，CO₃²⁻与之中和；当加入少量碱时，HCO₃⁻与之反应【2】。

核心应用场景【2】【5】：

1. ELISA包被：最经典的用途，pH 9.6的碳酸盐缓冲液是抗体/抗原包被的首选

2. 蛋白与抗体偶联：为偶联反应提供碱性环境

3. 免疫检测：维持实验体系的酸碱度稳定

4. 核心参数：碳酸盐缓冲液的常用有效缓冲范围为pH 9.2-10.6（部分文献报道可延伸至9.0-10.7）【6】。Ca²⁺、Mg²⁺存在时不得使用【1】——二价阳离子会与碳酸根生成沉淀，导致缓冲液失效。

二、配方成分与表格

常用配方一：pH 9.6碳酸盐缓冲液（ELISA包被经典配方）【1】

配制后pH约为9.6，置于4℃保存【1】。

⚠️ 称量注意：无水碳酸钠分子量106，十水合碳酸钠（Na₂CO₃·10H₂O）分子量286.2，两者不可混用。如使用十水合碳酸钠，需按286.2重新计算称量【5】。称量前确认试剂无吸潮结块，如有结块建议在干燥器中干燥后使用。

常用配方二：0.1 mol/L碳酸盐缓冲液（pH 9.2-10.6） 【2】【3】【4】

通过分别配制0.1 mol/L碳酸钠和碳酸氢钠溶液，按不同比例混合得到目标pH：

将两者混合后，加去离子水定容至100 mL（终浓度0.1 mol/L）【4】。

常用配方三：0.2 mol/L碳酸盐缓冲液（pH 9.2-10.7） 【7】

将两者混合后，加去离子水定容至50 mL。本表仅列出部分代表性pH值，完整pH列表可参考相关文献。

母液配制参考【5】：

1. 0.1 mol/L Na₂CO₃：称取10.6 g无水碳酸钠（或28.62 g Na₂CO₃·10H₂O），定容至1 L

2. 0.1 mol/L NaHCO₃：称取8.40 g碳酸氢钠，定容至1 L

三、配制步骤（以pH 9.6 ELISA包被缓冲液为例）【1】

1. 称量：称取1.59 g无水碳酸钠和2.94 g碳酸氢钠。称量前确认试剂无吸潮结块。

2. 溶解：加入约800 mL蒸馏水（建议使用去离子水或去二氧化碳蒸馏水），搅拌至完全溶解。

3. 定容：加蒸馏水定容至1 L，充分混匀。

4. pH检查：用pH计检查pH是否为9.6（不建议使用pH试纸，精度不足），如有偏差可用少量1 mol/L NaOH或HCl微调【2】。

5. 灭菌（可选） ：如需无菌（如ELISA包被），可用0.22 μm滤膜过滤除菌【2】。

6. 保存：4℃密闭保存【1】。

⚠️ 关键提醒【1】【2】【5】：

1. Ca²⁺、Mg²⁺存在时不得使用——二价阳离子会与碳酸根生成不溶性沉淀（如碳酸钙、碳酸镁），不仅消耗有效成分，沉淀物还可能堵塞移液器或影响ELISA读数。

2. 必须密闭保存——碳酸盐缓冲液会吸收空气中的CO₂，导致pH下降【1】。

3. 有效期：4℃密闭保存一般可达12个月【1】；部分商业产品标注室温保存也可【4】，但建议4℃更稳妥。如出现沉淀、浑浊或pH明显偏离，应重新配制。

4. 碳酸钠需注意形态——无水碳酸钠（分子量106）与十水合碳酸钠（分子量286.2）称量不同，不可混用【5】。

5. 碳酸盐缓冲液不建议在pH 9.2以下使用，缓冲能力会显著下降【1】。

四、商业化便捷选择——杭州富沃克生物

自己配制碳酸盐缓冲液虽然步骤简单，但碳酸钠的精确称量（注意区分无水盐和结晶水盐）、pH的精准校准、以及防止CO₂污染——每一步都影响最终的包被效率。如果追求省心省力，可以直接选择成熟的商业化产品。

杭州富沃克生物科技有限公司推出的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲溶液（0.1 mol/L，pH 9.6） ，采用高纯度碳酸钠和碳酸氢钠原料精准配制，pH精确校准（25℃），无菌过滤，即开即用，省去自行配制的繁琐与批次波动风险。适用于ELISA抗体/抗原包被、蛋白与抗体偶联、免疫检测等多种实验场景。

邮箱：support@fwkbio.com

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参考文献

[1] 碳酸盐缓冲溶液[EB/OL]. 百度百科. https://baike.baidu.com/item/碳酸盐缓冲溶液/15786151

[2] 碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液的原理与配制方法[EB/OL]. ChemicalBook. https://www.chemicalbook.com/NewsInfo_67367.htm

[3] 碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液(0.1mol/L,pH9.16-10.83)[EB/OL]. 生物在线, 2010-09-16. https://hsgbd17.bioon.com.cn/product/8bce10b2339bd

[4] 碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液(0.1mol/L,pH9.16-10.83)[EB/OL]. 生物谷（BioMart）, 2025-07-15. https://www.biomart.cn/infosupply/88772222.htm

[5] 碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液配制[EB/OL]. 禾川化学, 2013-08-25. http://www.hechuanchem.com/NewsView.asp?ID=94

[6] Carbonate-Bicarbonate Buffer (pH 9.2 to 10.6) Preparation and Recipe[EB/OL]. AAT Bioquest, 2026-06-19. https://www.aatbio.com/resources/buffer-preparations-and-recipes/carbonate-bicarbonate-buffer-ph-9-2-to-10-6

[7] 0.2mol/L碳酸盐缓冲液（pH9.2～10.7）[EB/OL]. 生物谷（BioMart）. https://www.biomart.cn/lab-web/news/article/3687nh0go515i.html