ECL 超敏发光液

ECL超敏发光液｜产品技术说明书.pdf

ECL超敏发光液
Western Blot化学发光底物｜HRP检测试剂盒｜飞克级灵敏度｜适配胶片/成像系统

别名：ECL发光液、超敏ECL底物、蛋白印迹检测试剂、化学发光显色液、Western Blot超敏发光底物

一、产品概述

富沃克生物推出的ECL超敏发光液是一款专为Western Blot及核酸杂交实验设计的高灵敏度化学发光检测试剂盒。本产品采用独特的发光底物系统（鲁米诺和增强剂），A液和B液等体积混合即得工作液，经辣根过氧化物酶（HRP）催化发出强荧光信号，可检测中飞克至极低飞克级抗原，尤其适合低丰度蛋白或痕量样本分析。

在Western Blot实验中，检测灵敏度直接决定实验的成败与数据质量。传统DAB或BCIP/NBT显色法灵敏度有限，难以检测低丰度靶蛋白；放射性同位素法虽然灵敏度高，但存在安全隐患和废液处理问题。化学发光法凭借其高灵敏度、安全无辐射、操作简便等优势，已成为蛋白检测的主流方法。本产品经过系统优化，在灵敏度、信号持续时间和信噪比等方面均达到优秀水平，是常规及高要求Western Blot实验的理想选择。信号持续稳定，发光时间可达1-8小时，信噪比高、背景低，适配胶片曝光及凝胶成像系统。产品现货供应，欢迎分子生物学实验室及科研单位老师选购。

二、技术原理

化学发光反应机制：本产品的发光原理基于鲁米诺（Luminol）在碱性条件下被HRP催化氧化的化学发光反应。在反应体系中，鲁米诺在HRP的存在下被过氧化氢氧化，生成处于激发态的3-氨基邻苯二甲酸根离子。当该离子从激发态回到基态时，释放出光子（波长为425nm附近），产生可被X光胶片或CCD相机捕获的化学发光信号。

增强剂体系的信号放大效应：产品A液中添加了特殊的信号增强剂，其作用机制包括：（1）显著提高鲁米诺的发光量子产率，使单位时间内发出的光信号更强；（2）延长发光平台的持续时间，使信号在较长时间内保持稳定而非快速衰减；（3）降低背景噪音，提高信噪比。通过增强剂与鲁米诺的协同作用，本产品可实现飞克级抗原的灵敏检测。

HRP酶促反应的信号放大链：在Western Blot检测中，一抗特异性识别目标蛋白，HRP标记的二抗结合于一抗。当ECL工作液与膜接触后，HRP持续催化底物氧化发光，单个酶分子可催化数千个底物分子的反应，产生显著的信号放大效应，使得极微量靶蛋白的检测成为可能。

三、核心优势

1. 飞克级灵敏度，检出低丰度靶蛋白：本产品具有极高的检测灵敏度，可检测中飞克至极低飞克级抗原。对于表达量极低的稀有蛋白或转录因子，以及珍贵临床样本中的痕量靶标，均能提供清晰的信号，帮助研究人员获得可靠数据。

2. 信号持续稳定，从容操作：发光信号在1-8小时内保持稳定，无明显衰减。这一特性为实验人员提供了充裕的操作窗口——无需在滴加工作液后争分夺秒地赶赴暗房，可从容调整曝光时间、反复摸索最佳曝光条件。即使同一张膜进行多次曝光，信号强度依然可靠。

3. 信噪比高、背景极低：优化的配方有效降低了非特异性背景，使目标条带清晰锐利。高信噪比意味着在较短的曝光时间内即可获得清晰的阳性信号，减少长时间曝光导致的背景干扰，有利于弱信号的检出及结果图片的展示。

4. 操作极其简便：A液和B液等体积混合即得工作液，无需复杂配制。将工作液覆盖于PVDF膜或硝酸纤维素膜上，孵育1-5分钟后即可进行胶片曝光或凝胶成像系统采集。无任何有毒有害试剂，无需放射性同位素的严格防护与废液处理。

5. 适配胶片及成像系统：产品发出的光信号可同时兼容X光胶片曝光和凝胶成像系统（CCD相机）采集。无论实验室配备的是传统暗房设备还是先进的化学发光成像仪，均可无缝衔接。

6. 经济耐用，适合常规使用：本产品提供多种规格包装，性价比高。非反复冻融条件下，底物稳定性良好，适合日常Western Blot检测及高通量筛选使用。

四、关键实验参数优化建议

为获得最佳检测效果，建议结合靶蛋白丰度对一抗和二抗的稀释比例进行适当调整：

• 一抗稀释比例：建议1:1,000-1:100,000（具体取决于抗体亲和力及靶蛋白丰度）

• 二抗稀释比例：建议1:50,000-1:500,000（较高稀释度有助于降低背景，提高信噪比）

初次使用或更换抗体批次时，建议进行梯度稀释实验以确定最优稀释比例。

五、适用场景

六、产品组分与包装规格

规格：提供10mL、50mL、100mL、500mL等多种包装，满足从常规实验到高通量筛选的不同用量需求。

七、使用说明

工作液配制：

1. 根据实验所需用量，将A液和B液按1:1等体积混合，充分颠倒混匀（建议A液和B液各取1.0mL混合，每7.5×8.5cm大小的膜约需1.0-2.0mL工作液）

2. 工作液需现配现用，避免长时间放置导致活性下降

膜孵育与检测：

1. 完成一抗孵育及HRP标记二抗孵育后，用洗涤缓冲液充分洗膜

2. 将配制的ECL工作液均匀覆盖在膜的蛋白面（确保工作液完全浸润）

3. 室温孵育1-5分钟

4. 去除多余液体，将膜置于两层保鲜膜之间

5. 进行胶片曝光或化学发光成像仪采集

建议曝光时间：起始可尝试30秒至5分钟曝光，根据信号强弱适当调整。

八、注意事项

• 避免叠氮钠污染：叠氮钠（NaN₃）是HRP的强抑制剂，可不可逆地结合HRP并抑制其活性。实验中切勿使用含叠氮钠的溶液作为抗体保存液或洗涤缓冲液。建议使用硫柳汞或Proclin系列防腐剂作为替代。

• 防止交叉污染：吸取A液和B液时务必更换枪头，避免两种溶液之间的交叉污染导致工作液性能下降。

• 工作液现配现用：混合后的工作液应尽快使用，不宜长期存放。

• 避光保存：A液和B液需在2-8℃避光条件下保存，避免强光照射导致发光底物分解失效。

九、常见问题与解决建议

十、储存条件与有效期

• 2-8℃避光保存，不可冷冻

• 有效期：至少12个月（以包装标签为准）

• 运输：冰袋运输，收到后请及时存放于2-8℃

十一、订购信息

本产品现货供应，提供多种规格（10mL / 50mL / 100mL / 500mL）以满足不同通量需求。欢迎各分子生物学实验室、科研院所、医疗机构及生物医药企业来电来函咨询选购。富沃克生物提供专业的技术支持与售后服务，协助您优化Western Blot检测条件，获得理想实验结果。

富沃克生物 —— 专注生命科学工具，以高灵敏度发光底物赋能蛋白检测的精准与可靠。

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