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核糖核酸酶A(RNase A)| 质粒提取专用 | RNA消化酶 | 无DNase/蛋白酶 | CAS:9001-99-4
别名:RNase A酶、核糖核酸内切酶、Ribonuclease A
一、产品概述
富沃克生物推出的核糖核酸酶A(RNase A)是一款高品质的分子生物学级工具酶。本品来源于牛胰腺,以高纯度溶液形式供应,经热处理去除DNase活性,并以50%甘油缓冲液精准配制,浓度准确、酶活稳定,不含DNase和蛋白酶。RNase A是一种含4个二硫键的单链多肽,分子量约为13.7 kDa。作为一种内切核糖核酸酶,它能够专一性地攻击RNA上嘧啶残基(胞嘧啶C和尿嘧啶U)的3‘端,切割与相邻核苷酸形成的磷酸二酯键。反应终产物是嘧啶3’磷酸及末端带嘧啶3‘磷酸的寡核苷酸。本品不含DNase和蛋白酶,使用前无需热处理,可直接使用。
在质粒DNA和基因组DNA制备过程中,RNA污染是影响产物纯度与下游实验准确性的关键因素之一。残留的RNA会干扰紫外分光光度法对DNA浓度的准确定量,也可能在后续的酶切、测序或转染等实验中引入非特异性背景。RNase A通过特异性降解RNA,为获得高纯度DNA提供了高效、可靠的解决方案,是分子生物学实验室中不可或缺的核心工具酶。
二、技术原理
RNase A是一种内切核糖核酸酶,其作用机制具有高度特异性。它能够专一性地催化单链RNA中嘧啶核苷酸(胞嘧啶C和尿嘧啶U)残基的3‘端与相邻核苷酸5’端之间的磷酸二酯键的水解。这一切割反应产生具有2‘,3’-环磷酸的中间产物,后者可进一步水解为相应的3‘-核苷磷酸盐。RNase A对DNA不起作用,这一选择性使其成为DNA纯化过程中去除RNA污染的理想工具。
底物特异性与反应条件:RNase A切割单链RNA活性最高,也可作用于双链RNA以及RNA-DNA杂交形成的RNA链。在低盐浓度(0-100 mM NaCl)条件下,RNase A可以切割多种形式的RNA;当NaCl浓度大于300 mM时,则特异性切割单链RNA。该酶在多种反应条件下均有活性,兼容于各种反应体系。
三、产品来源与品质
本品来源于牛胰腺,通过先进的提取与纯化工艺制得。牛胰腺是RNase A的经典来源,其酶学特性已被充分研究和验证。产品经过严格的热处理工艺,有效去除DNase活性,确保在DNA制备过程中不会因DNase污染而导致目标DNA的降解。本品不含DNase和蛋白酶,使用前无需热处理,可直接使用。
酶活单位定义:在25°C和pH 5.0条件下,使RNA以k(速度常数)等于单位(Kunitz units)的酶量定义为一个活性单位。
四、核心优势
1. 无DNase和蛋白酶,保障DNA完整性:产品经过严格质量控制,不含DNase和蛋白酶活性。确保在去除RNA污染的同时,不会对目标DNA造成降解或对蛋白质样本产生损伤,保障下游实验的可靠性。
2. 即用型溶液,操作便捷:本产品以溶液形式提供,以50%甘油缓冲液配制,无需自行称量溶解。开瓶即用,可直接加入DNA样品中,显著节省实验准备时间,避免配制过程中的污染风险。
3. 高特异性,高效去除RNA:RNase A能够专一性地降解RNA中的嘧啶核苷酸磷酸二酯键。可高效去除质粒DNA和基因组DNA制备过程中残留的RNA污染,提高DNA产物的纯度。
4. 兼容多种实验体系:推荐工作浓度为1-100 μg/mL,兼容于各种反应体系。可根据不同的应用类型灵活调整使用浓度,适用于质粒提取、基因组DNA制备、蛋白纯化等多种实验场景。
5. 使用前无需热处理:本品不含DNase和蛋白酶,使用前无需进行热处理灭活DNase的步骤。直接使用即可,简化操作流程,避免热处理可能对样品造成的负面影响。
五、技术参数
| 参数项目 | 规格说明 |
|---|---|
| 产品名称 | 核糖核酸酶A / RNase A |
| CAS号 | 9001-99-4 |
| 来源 | 牛胰腺 |
| 分子量 | 约13.7 kDa(单体) |
| 外观 | 无色透明溶液 |
| 浓度 | 10 mg/mL / 100 mg/mL(多种规格) |
| 保存缓冲液 | 50%甘油,10 mM Tris-HCl,pH 7.5-8.0 |
| 酶活 | ≥50 Kunitz units/mg protein |
| DNase活性 | 未检出 |
| 蛋白酶活性 | 未检出 |
| 推荐工作浓度 | 1-100 μg/mL |
| 保存条件 | -20℃冷冻保存 |
| 有效期 | 详见产品标签 |
六、主要应用场景
| 应用领域 | 具体用途 |
|---|---|
| 质粒DNA制备 | 碱裂解法提取质粒DNA后,去除残留的RNA污染 |
| 基因组DNA提取 | 从动物、植物或微生物组织中提取基因组DNA时去除共纯化的RNA |
| 蛋白纯化 | 去除蛋白样品中残留的RNA污染 |
| RNA酶保护分析 | 用于RNA酶保护实验(RNase protection assay) |
| RNA序列分析 | 用于RNA结构分析和序列测定 |
| 分子生物学研究 | 各种需要去除RNA污染的分子生物学实验 |
七、使用说明
质粒DNA中去除RNA(推荐方案) :
RNase A在质粒中的终浓度推荐为100 μg/mL。
在质粒DNA溶液中按照1/100体积加入10 mg/mL RNase A溶液。例如:50 μL质粒DNA中加入0.5 μL RNase A溶液。
37℃孵育10分钟即可完成RNA消化。
孵育后可直接进行后续实验或进一步纯化。
基因组DNA制备中的使用:
可根据样品体积和RNA污染程度,在DNA溶液中加入RNase A至终浓度10-100 μg/mL。
37℃孵育30分钟至1小时,或根据实验方案调整。
孵育后可进行酚-氯仿抽提或乙醇沉淀去除消化后的RNA片段。
一般使用建议:
推荐工作浓度为1-100 μg/mL,具体浓度因应用类型的不同而异。
可在多种反应条件下使用,兼容于各种反应体系。
使用前无需热处理,可直接使用。
八、注意事项
避免RNase污染:RNase A本身是一种RNase酶,操作时应注意避免其污染到需要保留RNA的实验体系。建议使用专用的器具和耗材,操作时佩戴手套。
仅供科研使用:本产品仅供科学研究使用,不得用于临床诊断或治疗。
操作安全:为了您的安全和健康,操作时请穿实验服并佩戴一次性手套。
保存注意:本品含50%甘油,-20℃冷冻保存时不结冰,为粘稠液体状态,取用前应充分混匀。
九、储存条件与有效期
保存条件:-20℃冷冻保存。含50%甘油,-20℃不结冰。
运输条件:冰袋或湿冰运输。
有效期:详见产品标签。建议分装保存,避免反复冻融。
十、订购信息
本产品现货供应,提供10 mg/mL及100 mg/mL等多种浓度规格。欢迎各分子生物学实验室、科研院所、生物医药企业及高校课题组来电来函咨询选购。富沃克生物提供专业的技术支持与售后服务。
富沃克生物 —— 专注生命科学工具,以高品质RNase A赋能核酸纯化与分子生物学研究的每一个环节。
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