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50×TAE缓冲液是核酸电泳实验中最常用的储备液之一,由Tris碱、乙酸和EDTA组成。作为50倍浓缩液,使用时稀释至1×工作浓度即可。其1×工作液的组成为40 mM Tris-乙酸和1 mM EDTA,pH通常在8.0-8.5之间。该溶液在琼脂糖凝胶电泳中应用最为广泛,尤其适合大于13 kb的大片段DNA分离,以及基因组DNA和超螺旋DNA的电泳分析。与TBE相比,TAE中双链线状DNA的迁移率更快,且不含硼酸盐,不影响后续的DNA回收和酶反应,因此在需要电泳后进行DNA凝胶回收或酶切鉴定的实验中是首选缓冲液。TAE同样适用于核酸的聚丙烯酰胺凝胶电泳,部分厂家还提供经DEPC处理的RNase-free级50×TAE,可用于RNA电泳。
使用50×TAE时,将1份浓缩液与49份蒸馏水或去离子水混合即可得到1×工作液。TAE的缓冲容量相对较小,长时间电泳需定期更换缓冲液,否则正负极pH漂移会影响电泳效果。TAE在低温下可能析出沉淀,此为正常现象,置于37℃水浴加热溶解后摇匀即可,不影响使用效果。室温密封保存即可,有效期通常为12个月以上。
TAE与TBE的选择主要取决于实验目的。TAE缓冲能力相对较低,但DNA回收效率高、不影响下游酶反应,适合胶回收和大片段DNA电泳。TBE缓冲能力强,适合长时间电泳和小片段DNA分离,但硼酸成分会抑制酶反应,不适合后续回收实验。若电泳时间较短且后续需回收DNA,优先选择TAE;若需长时间电泳或分离小片段,可选用TBE。
杭州富沃克生物科技有限公司提供多种规格的50×TAE缓冲液产品,采用高纯原料配制,经0.22 μm过滤除菌,适用于琼脂糖凝胶电泳、DNA片段回收等核酸分析实验场景。
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