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DNase I通常从牛胰腺中纯化获得,分子量约29-32kDa,活性依赖于钙离子,并受镁离子或锰离子激活。该酶的活性单位通常定义为:在37℃、10分钟内完全降解1μg质粒DNA所需的酶量。
DNase I的核心应用包括RNA样本中去除基因组DNA污染、降低细胞裂解液粘度、细胞复苏后减少结块以及缺口平移与DNA片段化。在RT-PCR、Northern blot、体外转录等RNA相关实验中,DNase I是去除RNA制备物中残留基因组DNA的标准工具。细菌裂解后释放的染色体DNA会导致溶液粘稠,加入DNase I可改善操作便利性。DNase I溶液也常用于解离细胞悬液,通过降解高浓度或冻存细胞悬液中释放的DNA,减少细胞聚集。此外,DNase I还可用于缺口平移标记DNA及制备随机DNA片段。
DNase I的活性依赖钙离子,镁离子或锰离子可作为激活剂,使用EGTA或无钙缓冲液会显著降低酶活性。高浓度单价离子(如100mM Na⁺、K⁺)会抑制其活性。失活时通常加入EDTA至终浓度2.5-5mM后65-75℃加热10分钟,为避免加热过程中RNA被降解,应确保EDTA足以螯合体系中的镁离子。常见产品规格有1 mg/mL、1 U/μL、2000 U/mL、2500 U/mL,保存于-20°C(不宜存放在无霜冰箱),部分产品附带10×反应缓冲液。
杭州富沃克生物科技有限公司提供多种规格的DNase I溶液产品,涵盖无RNase级和蛋白级,适用于RNA样本DNA去除、细胞裂解液处理等实验场景。
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