蛋白诱导“开关”：24mg/ml IPTG 配制全指南

在分子生物学与蛋白表达实验中，IPTG（异丙基-β-D-硫代半乳糖苷）是最常用的蛋白诱导剂，被誉为蛋白诱导的“精准开关”。其核心功能是特异性诱导含lac操纵子的重组菌株表达目标蛋白，无需代谢消耗，诱导效率高、特异性强，广泛适配原核蛋白表达（如大肠杆菌BL21菌株）、蛋白纯化前诱导等实验场景。作为重组蛋白表达实验的核心试剂，IPTG的配制纯度、浓度准确性及无菌性，直接影响目标蛋白的诱导效率、表达量及活性，是保障蛋白表达实验顺利开展的关键前提。

IPTG的诱导原理简洁且精准：IPTG可模拟乳糖的结构，与大肠杆菌体内的阻遏蛋白结合，使阻遏蛋白构象发生改变，从而脱离lac操纵子，解除其对下游目标蛋白基因的抑制作用，启动目标蛋白的大量转录与表达。与天然诱导剂乳糖相比，IPTG不被细菌代谢分解，可在细胞内持续积累，维持稳定的诱导状态，且诱导浓度易控制，能有效避免乳糖代谢带来的诱导效率波动，大幅提升蛋白表达的稳定性与重复性。

24mg/ml IPTG母液是实验室最常用的储备液浓度，配制便捷、保存稳定，可根据实验需求稀释至适宜工作浓度（通常为0.1~1mM），适配不同菌株、不同目标蛋白的诱导需求。其配制核心要点在于无菌操作、避免IPTG变性，同时严格控制浓度与保存条件，确保诱导活性不下降。

24mg/ml IPTG 母液（50 ml 装）精准配方如下：

24mgml IPTG 母液（50ml装）精准配方.pdf

⚠️ 实验关键注意事项：

1.  无菌操作规范：IPTG母液用于重组菌株的蛋白诱导，杂菌污染会严重影响菌株生长与目标蛋白表达，因此全程需在超净台内进行无菌操作；所有实验器皿、试剂均需提前灭菌，操作过程中避免手套、口罩接触溶液与器皿管口，防止污染。

2.  防变性与活性保护：IPTG易溶解，但高温、反复冻融会导致其变性，丧失诱导活性；配制过程中避免加热溶解，常温溶解即可；过滤除菌时，滤器与溶液均需处于室温，避免低温导致IPTG析出；严禁反复冻融同一份IPTG母液，按需分装可有效避免此问题。

3.  滤器核查要点：过滤除菌前，务必仔细核查0.22μm滤器的完整性，若滤器破损、漏液，会导致除菌不彻底，进而污染IPTG母液；过滤时动作要缓慢，避免溶液流速过快导致滤器堵塞或破损。

4.  分装与保存规范：IPTG母液需小份分装（1ml/份），-20℃避光、密封保存，有效期约6个月；若发现溶液出现浑浊、沉淀、变色等现象，表明IPTG已变性失效，需丢弃重配；取用后立即放回-20℃冰箱，避免室温放置过久（室温放置超过1小时会影响诱导活性）。

5.  操作安全与废液处理：IPTG本身毒性较低，但仍需避免直接接触皮肤、黏膜，若不慎接触，立即用大量去离子水冲洗；配制过程中产生的废液、废弃的IPTG溶液，需收集至专用废液桶中，交由专业机构集中处理，严格遵循实验室废液处理规范。

6.  浓度控制要点：IPTG母液终浓度需精准控制在24mg/ml，称量与定容时需精准操作，浓度偏差会导致后续诱导实验中目标蛋白表达量不足或过度诱导（影响蛋白活性）；若配制时出现称量误差，需重新称量配制，不可随意稀释或添加溶剂调整浓度。

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