Solution I – 质粒提取细菌重悬液（1L 配制）

Solution I – 质粒提取细菌重悬液（1L 配制）

用途说明
用于质粒DNA提取流程中过夜培养菌体沉淀的充分重悬，是碱裂解法前处理的关键步骤。

工作液组分浓度

• 25 mM Tris-HCl（pH 8.0）

• 10 mM EDTA

• 50 mM Glucose

配制方法（1L 体系）

1. 依次量取 25 ml 1 M Tris-HCl（pH 8.0）、20 ml 0.5 M EDTA（pH 8.0）、45 ml 20% Glucose（1.11 M），加入约 900 ml dH₂O 混匀，最终定容至 1 L。

2. 高温高压灭菌（121°C，20 min），冷却后于 4°C 保存。

3. 使用前，按每 50 ml Solution I 加入 2 ml RNase A（20 mg/ml）的比例添加 RNase，混匀后即可使用。

关键操作要点

• 本溶液须高压灭菌后方可使用，避免细菌污染干扰后续实验。

• 重悬菌体时务必彻底、无肉眼可见菌块，否则裂解不充分会显著降低质粒回收效率。

• RNase A 需在使用前现加，不可提前加入灭菌，以免酶活性下降。