Salmon DNA – 10mg/ml 鲑鱼精DNA杂交封闭液（约100ml 配制）

Salmon DNA – 10mg/ml 鲑鱼精DNA杂交封闭液（约100ml 配制）

用途说明
用于Southern blot、Northern blot等核酸杂交实验中封闭硝酸纤维素膜或尼龙膜上的非特异性DNA结合位点，降低杂交背景，提高检测特异性。

工作液浓度

• 10 mg/ml Salmon DNA

配制方法（约100ml 体系）

1. 称取2g 鲑鱼精DNA，置于500ml烧杯中，加入约200ml TE Buffer。

2. 磁力搅拌器室温搅拌2～4小时至完全溶解，加入4ml 5M NaCl（终浓度0.1M）。

3. 分别用等体积苯酚和苯酚/氯仿各抽提1次，去除蛋白质。

4. 回收水相，用17号皮下注射针头快速吸打约20次，使DNA片段化（剪切至平均大小200～500bp）。

5. 加入2倍体积预冷无水乙醇，进行乙醇沉淀。

6. 离心回收DNA沉淀，溶解于约100ml去离子水中，测定OD₂₆₀值计算浓度。

7. 用去离子水稀释至10mg/ml。

8. 煮沸10分钟使DNA变性，分装成小份（1ml/份），-20℃保存。

9. 使用前于沸水浴加热5分钟后，迅速冰浴冷却，即可用于杂交封闭。

关键操作要点

• 反复冻融：长期反复冻融会导致DNA断裂或降解，建议小份分装，避免反复冻融。

• 溶解问题：若溶解过程溶液始终浑浊，可能含有杂质或未完全溶解，应延长搅拌时间或适当加热（<60℃）辅助溶解，最后务必过滤。

• 变性处理：使用前必须煮沸变性并迅速冰浴，使DNA呈单链状态，才能有效竞争性封闭膜上的非特异性位点。