DNA杂交预杂交液/杂交液 – Southern blot膜封闭与杂交液（100ml 配制）

DNA杂交预杂交液/杂交液 – Southern blot膜封闭与杂交液（100ml 配制）

产品用途
用于Southern blot、斑点杂交等核酸印迹实验中的膜封闭及探针杂交步骤。Denhardt's溶液和变性的鲑鱼精DNA协同封闭硝酸纤维素膜或尼龙膜上的非特异性DNA结合位点，SDS降低背景信号，6×SSC提供核酸退火所需的高离子强度环境。

核心组分及终浓度

• 6×SSC（或SSPE）

• 5×Denhardt's

• 0.5%（W/V）SDS

• 100μg/ml 鲑鱼精DNA

配制方法（100ml 体系）

1. 按以下顺序量取各组分，置于200ml烧杯中：

• 30 ml 20×SSC（或20×SSPE）

• 10 ml 50×Denhardt's

• 5 ml 10% SDS

• 1 ml 10mg/ml 鲑鱼精DNA

• 54 ml dH₂O

2. 充分混匀（可于磁力搅拌器上低速搅拌）。

3. 使用0.45μm滤器过滤去除杂质。

4. 即配即用，或4℃短期保存（建议不超过1周）。

关键操作要点

• 鲑鱼精DNA预处理：使用前必须将鲑鱼精DNA煮沸变性（沸水浴10分钟）并剪切至平均片段200～500bp（可用注射器针头反复抽打），方能有效竞争性封闭膜上的非特异性位点。

• 过滤除菌：本溶液含蛋白质（Denhardt's）和SDS，不可高压灭菌，须用0.45μm滤器过滤除菌。

• 保存建议：含鲑鱼精DNA的杂交液不建议长期保存，4℃避光存放，若出现沉淀或浑浊需重新配制。