RNA杂交预杂交液/杂交液 – Northern blot膜封闭与杂交液（100ml 配制）

RNA杂交预杂交液/杂交液 – Northern blot膜封闭与杂交液（100ml 配制）

产品用途
专用于Northern blot、RNA斑点杂交等RNA印迹实验中的膜封闭及探针杂交步骤。50%甲酰胺作为化学变性剂可降低核酸解链温度（Tm），使杂交在较低温度（如42℃）下进行，有效保护热不稳定的RNA模板免受高温降解；Denhardt's溶液与变性的鲑鱼精DNA协同封闭膜上非特异性位点，SDS降低背景信号，6×SSC提供核酸退火所需的高离子强度环境。

核心组分及终浓度

• 6×SSC（或SSPE）

• 5×Denhardt's

• 0.5%（W/V）SDS

• 50%（V/V）甲酰胺

• 100μg/ml 鲑鱼精DNA

配制方法（100ml 体系）

1. 按以下顺序量取各组分，置于200ml烧杯中：

• 30 ml 20×SSC（或20×SSPE）

• 10 ml 50×Denhardt's

• 5 ml 10% SDS

• 50 ml 甲酰胺

• 1 ml 10mg/ml 鲑鱼精DNA

• 4 ml RNase-free dH₂O

2. 充分混匀（可于磁力搅拌器上低速搅拌）。

3. 使用0.45μm滤器过滤去除杂质。

4. 即配即用，或-20℃避光短期保存。

关键操作要点

• RNase-free绝对要求：RNA极易被RNase降解，所有试剂、枪头、离心管、容器均须无RNase（经DEPC处理或使用RNase-free专用耗材），配制用水必须为DEPC处理水。

• 甲酰胺特性：甲酰胺为光敏性试剂，建议使用 freshly opened 分子生物学级去离子甲酰胺，配制时在通风橱内操作，避免吸入蒸气。

• 鲑鱼精DNA预处理：使用前须煮沸变性并剪切至200～500bp，方可有效竞争性封闭膜上的非特异性位点。

• 过滤除菌：本溶液不可高压灭菌，须用0.45μm滤器过滤除菌（滤器需预先用RNase-free水润洗）。

• 保存建议：含甲酰胺的杂交液建议现配现用，如需保存应分装后-20℃避光保存，避免反复冻融和光照