20×SSPE – 20倍浓缩磷酸盐-EDTA-氯化钠缓冲液（1L 配制）

20×SSPE – 20倍浓缩磷酸盐-EDTA-氯化钠缓冲液（1L 配制）

产品用途

20×SSPE是核酸杂交实验中常用的高盐浓缩缓冲液母液，与20×SSC功能相似但缓冲体系不同。SSPE含磷酸盐缓冲体系，在长时间杂交或洗涤过程中具有更强的pH稳定能力，磷酸盐还可协同保护核酸免受降解，EDTA螯合金属离子抑制核酸酶活性。适用于Southern blot、Northern blot、斑点杂交等核酸印迹实验中的杂交液及洗涤液配制，是SSC的理想替代品。

核心组分及终浓度（20×）

• 3.0 M 氯化钠（NaCl）

• 0.2 M 磷酸二氢钠（NaH₂PO₄·H₂O）

• 0.02 M EDTA（Na₂EDTA·2H₂O）

• pH 7.4（25℃条件下测定）

配制方法（1L 体系）

1. 称取 175.3 g NaCl、27.6 g NaH₂PO₄·H₂O（一水合物）和 7.4 g Na₂EDTA·2H₂O，置于1L烧杯中。

2. 加入约 800 ml 去离子水，磁力搅拌至完全溶解。

3. 加入 约6.5 ml 10N NaOH，调节pH至 7.4（室温下用pH计测定）。

4. 加去离子水定容至 1L，充分混匀。

5. 分装至适当容器，高温高压灭菌（121℃，20min）。

6. 灭菌后室温密封保存。

稀释参考速查表

SSPE与SSC的区别及选择建议

选择建议：进行长时间杂交或对pH稳定性要求较高的实验，推荐使用SSPE；常规洗涤和短期杂交，SSC即可满足需求。若下游涉及磷酸盐敏感实验（如某些显色反应），应避免使用SSPE。

关键操作要点

• 品型确认：本配方基于一水合磷酸二氢钠（NaH₂PO₄·H₂O，分子量137.99）。若使用无水磷酸二氢钠（分子量119.98），称样量应调整为 24.0 g（27.6 × 119.98/137.99）。

• EDTA溶解注意：Na₂EDTA·2H₂O在pH低于8.0时溶解缓慢，调节pH过程中EDTA逐渐溶解，最终溶液应完全澄清。若溶解困难，可先单独配制EDTA（调pH8.0）再加入。

• 低温沉淀处理：低温下溶液可能出现沉淀，于37℃水浴加热并摇匀至完全溶解后即可使用，不影响效果。

• 灭菌与pH：灭菌后pH可能有轻微变化（≤±0.1），一般不影响使用。

• 防污染与保存：建议分装成无菌小瓶，避免频繁开瓶引入污染。室温避光保存，有效期6个月至1年，若出现浑浊或絮状沉淀应废弃重配。