50×Denhardt's溶液 – 核酸杂交膜封闭剂（500ml 配制）

50×Denhardt's溶液 – 核酸杂交膜封闭剂（500ml 配制）

产品用途

50×Denhardt's溶液是核酸印迹杂交实验中广泛使用的膜封闭试剂，用于Southern blot、Northern blot、斑点杂交等实验中封闭硝酸纤维素膜或尼龙膜上的非特异性蛋白质结合位点。其三种大分子组分协同作用，可显著降低探针与膜载体的非特异性结合，减少杂交背景，提高检测信噪比。本产品以50倍浓缩形式提供，使用时按需稀释至1×工作浓度。

核心组分及终浓度（50×）

• 1%（w/v）Ficoll 400

• 1%（w/v）PVP-40（聚乙烯吡咯烷酮）

• 1%（w/v）BSA（牛血清白蛋白）

各组分作用说明

三种组分分子量不同、作用机制互补，共同构成高效的膜封闭体系。

配制方法（500ml 体系）

1. 称取 5g Ficoll 400、5g PVP-40、5g BSA，置于500ml烧杯中。

2. 加入约 400ml 无核酸酶去离子水，磁力搅拌至完全溶解（BSA溶解较慢，需充分搅拌）。

3. 加无核酸酶去离子水定容至 500ml，充分混匀。

4. 使用 0.45μm滤器 过滤除菌。

5. 分装成每份 25ml（或其他小份规格）。

6. -20℃冷冻保存。

使用方法

• 工作浓度：杂交实验中通常稀释至 1× 使用（如50ml杂交液中加入1ml 50×Denhardt's）。

• 稀释操作：解冻后充分混匀，按需取用，剩余部分继续-20℃保存，避免反复冻融。

关键操作要点

• 严禁高压灭菌：本溶液含BSA蛋白质，不可高压灭菌，否则蛋白质变性沉淀，丧失封闭活性。必须使用0.45μm滤器过滤除菌。

• 无核酸酶要求：务必使用无核酸酶（RNase/DNase-free） 的去离子水和容器，防止核酸酶污染导致探针或样本降解。

• 小份分装避免反复冻融：BSA对反复冻融敏感，反复冻融会导致蛋白质聚集、封闭效果下降。建议分装成小份（如25ml/份），每次取用一管，避免反复冻融。

• 污染判断：若溶液出现浑浊、絮状沉淀或异味，说明已滋生细菌或蛋白变性，应立即废弃，不可使用。

• 有效期：-20℃条件下可保存6个月至1年，分装后取用时应避免交叉污染。