1M DTT – 二硫苏糖醇还原剂溶液（20ml 配制）

1M DTT – 二硫苏糖醇还原剂溶液（20ml 配制）

产品用途

1M DTT（二硫苏糖醇）是分子生物学和蛋白化学中最常用的强还原剂之一，用于断裂蛋白质和多肽分子中的二硫键（–S–S–），将蛋白质还原为游离巯基（–SH）状态。主要应用于SDS-PAGE还原型上样缓冲液的配制、蛋白提取过程中防止巯基氧化、酶活性研究中维持酶的还原状态，以及DNA/RNA提取中破坏核蛋白复合体的二硫键。本品为1M浓缩储备液，使用前按实验需求稀释至适宜工作浓度（通常为1～100mM）。

核心组分及终浓度（1M）

• 1M 二硫苏糖醇（DTT，分子量154.25）

• 溶剂：0.01M NaOAc（pH 5.2）

配制方法（20ml 体系）

1. 称取 3.09g DTT，加入至50ml塑料离心管中。

2. 加入 20ml 0.01M NaOAc（pH 5.2） 溶液。

3. 充分搅拌或颠倒混匀至DTT完全溶解。

4. 使用 0.22μm无菌滤器 过滤除菌。

5. 在无菌条件下分装成小份（建议每份100～500μl，依单次用量而定）。

6. -20℃避光冻存。

各组分作用说明

使用方法

• SDS-PAGE上样缓冲液：在5×SDS-PAGE Loading Buffer中通常添加终浓度50～100mM DTT（替代β-巯基乙醇）。

• 蛋白提取：在裂解缓冲液中添加终浓度1～5mM DTT，防止蛋白巯基氧化聚集。

• 酶活性实验：按实验需求添加终浓度0.1～10mM DTT。

• 稀释方法：使用前取出一小份，室温融化后用相应缓冲液稀释至工作浓度（工作液需当日使用，不可保存）。

β-巯基乙醇（2-ME）与DTT对比

选择建议：DTT还原能力更强且气味远小于β-巯基乙醇，推荐在需要强还原条件或对气味敏感的实验中使用；β-巯基乙醇成本更低，适用于常规蛋白电泳上样缓冲液。

关键操作要点

• 强还原剂易氧化（最重要）：DTT暴露于空气中极易被氧化而失效，配制及分装过程应尽量减少与空气接触时间，建议使用前充氮气保护。

• 分装避免反复冻融（最重要）：取出一管DTT后应一次性用完，反复冻融会加速其氧化分解，导致还原活性显著下降。务必分装成单次使用的小份（如100μl、200μl、500μl）。

• 酸性缓冲液配制：DTT在碱性条件下（pH > 8.0）极不稳定，必须使用0.01M NaOAc（pH5.2）作为溶剂，以维持DTT的稳定性。

• 过滤除菌不可省略：DTT溶液不可高温高压灭菌（加热加速降解），必须使用0.22μm滤器过滤除菌。

• 有效期：-20℃避光保存可稳定6个月至1年。若解冻后溶液出现黄色或沉淀，说明DTT已严重氧化，应废弃不可使用。

• 解冻操作：使用前取出小份于室温或冰上解冻，解冻后立即使用，不可反复放置室温。

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