10mM ATP – 三磷酸腺苷溶液（20ml 配制）

10mM ATP – 三磷酸腺苷溶液（20ml 配制）

产品用途

10mM ATP（三磷酸腺苷）是分子生物学和生物化学实验中关键的能量底物和磷酸基团供体，广泛用于激酶反应（磷酸化实验）、DNA连接反应（ATP是DNA连接酶的必需辅因子）、PCR/qPCR、体外转录、荧光素酶活性测定及其他需要ATP参与的酶学反应。本品以10mM浓度储备液形式提供，使用前按实验需求稀释至适宜工作浓度。

核心组分及终浓度（10mM）

• 10mM 三磷酸腺苷（ATP，分子量551.14，Na₂ATP·3H₂O）

• 溶剂：25mM Tris-HCl（pH8.0）

配制方法（20ml 体系）

1. 称取 121mg Na₂ATP·3H₂O（三磷酸腺苷二钠盐，三水合物），加入至50ml塑料离心管中。

2. 加入 20ml 25mM Tris-HCl（pH8.0） 溶液。

3. 充分搅拌或颠倒混匀至ATP完全溶解（溶解较慢，可室温磁力搅拌数分钟）。

4. 在无菌条件下分装成小份（建议每份50～500μl，依单次用量而定）。

5. -20℃避光冻存。

使用方法

• 激酶反应：通常终浓度0.1～1mM ATP，根据具体激酶实验方案调整。

• DNA连接反应：T4 DNA连接酶反应缓冲液中通常含终浓度0.5～1mM ATP。

• 体外转录：反应体系中通常含终浓度1～10mM ATP。

• 稀释方法：使用前取出一小份，冰上解冻后用相应缓冲液稀释至工作浓度，剩余部分不可反复冻融，建议一次性用完。

关键操作要点

• 光敏感性（最重要）：ATP对光敏感，见光易分解，必须使用棕色离心管分装，或使用普通离心管后用铝箔纸严密包裹，全程注意避光操作。

• 防护要求：ATP对眼睛有一定刺激性，操作时请佩戴手套和护目镜，避免粉末飞扬或溶液溅入眼中。

• 分装避免反复冻融：ATP在反复冻融过程中易降解失活，建议分装成单次使用的小份（如50μl、100μl、200μl），避免大瓶反复取用和冻融。

• 不可高温高压灭菌：ATP遇热极易降解，不可高温高压灭菌。配制时使用无菌Tris-HCl缓冲液并在洁净条件下操作，无需额外灭菌。

• pH稳定性：ATP在碱性条件下更稳定，25mM Tris-HCl（pH8.0）缓冲液可提供适宜的pH环境，延长ATP保存期限。

• 有效期：-20℃避光保存可稳定6个月至1年。若解冻后溶液出现浑浊、沉淀或颜色变化，说明ATP已降解，应废弃。

• 解冻操作：使用前取出小份于冰上解冻，解冻后立即使用，不可反复放置室温。

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