考马斯亮蓝R-250染色液 – 蛋白凝胶染色液（约1L 配制）

考马斯亮蓝R-250染色液 – 蛋白凝胶染色液（约1L 配制）

产品用途

考马斯亮蓝R-250染色液是SDS-PAGE蛋白电泳后检测凝胶中蛋白质条带最经典、最常用的染色方法。考马斯亮蓝R-250通过静电作用和疏水作用与蛋白质结合，形成蓝色复合物，染色灵敏度可达0.1～1μg蛋白条带。适用于SDS-PAGE凝胶、非变性PAGE凝胶及等电聚焦凝胶的蛋白质染色检测，是蛋白纯化分析、Western blot质控和蛋白表达检测的基础染色方法。

核心组分及终浓度

• 0.1%（W/V）考马斯亮蓝R-250 – 蛋白质结合染料

• 25%（V/V）异丙醇 – 作为溶剂及蛋白固定剂

• 10%（V/V）冰醋酸 – 酸性介质，促进染料与蛋白结合

配制方法（约1L 体系）

1. 称取 1g 考马斯亮蓝R-250，置于1L烧杯中。

2. 量取 250ml 异丙醇，加入烧杯中，磁力搅拌至染料完全溶解（搅拌约15～30分钟）。

3. 加入 100ml 冰醋酸，搅拌均匀。

4. 加入 650ml 去离子水，继续搅拌至充分混匀。

5. 用滤纸（定性滤纸或滤膜）过滤去除未溶解的颗粒物质。

6. 转移至试剂瓶中，室温密封保存。

各组分功能详解

使用方法

1. 电泳结束后，将凝胶剥离并置于染色容器中。

2. 加入足量染色液（至少完全覆盖凝胶），室温摇床轻摇染色2～4小时（或过夜）。

3. 染色结束后回收染色液（可重复使用2～3次）。

4. 加入考马斯亮蓝脱色液（10%冰醋酸，5%乙醇），脱色至背景清晰透明，蛋白条带呈深蓝色即可。

5. 脱色液需更换2～3次以加速脱色。

染色原理

考马斯亮蓝R-250分子中的磺酸基团与蛋白质碱性氨基酸（尤其是精氨酸）的阳离子位点通过静电作用结合，同时染料的疏水芳香环与蛋白质的疏水区域通过疏水相互作用结合，形成稳定的蓝色复合物。异丙醇可使蛋白质沉淀固定于凝胶中，冰醋酸提供酸性环境增强染料结合力。

关键操作要点

• 充分溶解：考马斯亮蓝R-250在异丙醇中溶解较慢，需充分搅拌至完全溶解（溶液呈深蓝色透明状）后再加水稀释。

• 过滤除颗粒：未完全溶解的染料颗粒会导致染色背景不均匀，必须用滤纸过滤去除颗粒物质。

• 染色时间：染色2～4小时通常足以使蛋白条带充分显色。若蛋白量较低（<0.1μg），建议过夜染色以提高灵敏度。

• 染色液可回收：染色液可重复使用2～3次，但随使用次数增加染色效率会下降。使用前若出现沉淀需重新过滤。

• 废液处置（重要）：染色液含有异丙醇和冰醋酸，属于危险有机废液，严禁直接倒入下水道，必须倒入专门的有机溶剂废液桶，按实验室危险废物标准统一处理。

• 容器选择：建议使用玻璃或聚丙烯容器盛装染色液，避免与某些塑料发生反应。

常见问题排查

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