考马斯亮蓝染色脱色液 – 蛋白凝胶脱色液（1L 配制）

考马斯亮蓝染色脱色液 – 蛋白凝胶脱色液（1L 配制）

产品用途

考马斯亮蓝染色脱色液用于SDS-PAGE蛋白电泳后考马斯亮蓝R-250染色凝胶的背景脱色。染色后的凝胶中，蛋白质条带与染料结合呈深蓝色，而未与蛋白质结合的游离染料则附着于凝胶基质中。脱色液通过洗脱凝胶中非特异性结合的游离染料，使背景区域褪至透明或淡蓝色，同时保留结合在蛋白质上的染料分子，从而使蛋白条带清晰显现。本配方为经典脱色液（10%醋酸+5%乙醇），适用于常规SDS-PAGE凝胶的快速脱色。

核心组分及终浓度

• 10%（V/V）冰醋酸 – 酸性介质，促进染料分子从凝胶中解离和扩散

• 5%（V/V）乙醇 – 有机溶剂，增强染料分子的溶解性和扩散速率

配制方法（1L 体系）

1. 量取以下各组分，置于1L烧杯中：

• 100ml 冰醋酸

• 50ml 无水乙醇

2. 加入 850ml 去离子水。

3. 充分搅拌均匀后即可使用。

4. 室温密封保存。

使用方法

1. 考马斯亮蓝R-250染色结束后，将凝胶转移至脱色容器中。

2. 加入足量脱色液（完全覆盖凝胶），室温摇床轻摇脱色30～60分钟。

3. 更换新鲜脱色液，继续脱色，重复更换2～3次直至背景清晰透明、蛋白条带呈鲜明的深蓝色。

4. 脱色完成后，凝胶可拍照记录或扫描保存。

各组分功能详解

关键操作要点

• 多次更换脱色液（最重要）：脱色是一个动态平衡过程，单次脱色液吸附染料饱和后效率显著降低，必须更换新鲜脱色液2～3次，直至凝胶背景完全清晰，方可获得最佳对比度的蛋白条带图像。

• 脱色程度判断：过度脱色会导致低丰度蛋白条带变淡甚至消失，建议在脱色过程中每隔20～30分钟检查一次，当背景清晰且目标条带可见时即可终止脱色。

• 摇床速度：脱色时摇床转速不宜过快（建议30～50rpm），避免凝胶卷曲或破损。

• 废液处置（最重要）：脱色后的液体含有溶解的染料、醋酸和乙醇，属于危险有机废液，严禁直接倒入下水道，必须收集到有机废液桶中，按实验室危险废物标准统一处理。

• 脱色液可重复使用：初次脱色液（含染料量高）使用后可收集作第一轮脱色用，第二轮和第三轮使用新鲜脱色液效果更佳。但回收的脱色液不可无限循环，染色过深时建议更换全新脱色液。

快速脱色技巧

• 加热脱色：将脱色液预热至40～50℃可显著加速脱色过程（需注意加热会导致乙醇挥发，容器应加盖）。

• 微波炉辅助脱色：将凝胶置于脱色液中，微波炉中低火加热约1分钟，取出摇匀，重复2～3次，可在10～20分钟内完成脱色（需注意加热时间不宜过长以防凝胶过热膨胀变形）。

常见问题排查

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