10×PBST – 磷酸盐吐温洗涤缓冲液（1L 配制）

10×PBST – 磷酸盐吐温洗涤缓冲液（1L 配制）

产品用途

10×PBST（磷酸盐吐温缓冲液）是Western blot、ELISA、免疫组化（IHC）等免疫学实验中最常用的洗涤缓冲液。PBS提供稳定的离子环境和pH缓冲能力，Tween-20作为非离子型表面活性剂可有效降低非特异性结合，洗去未结合的抗体和探针，从而降低背景信号，提高检测特异性。本产品为10倍浓缩液，使用时需稀释至1×工作浓度。适用于膜洗涤（Western blot、Southern blot、Northern blot）、ELISA板孔洗涤及细胞培养中的细胞洗涤等场景。

核心组分及终浓度（10×）

• 1.37M 氯化钠（NaCl） – 维持离子强度和渗透压

• 27mM 氯化钾（KCl） – 补充钾离子，维持生理离子环境

• 100mM 磷酸氢二钠（Na₂HPO₄） – 缓冲体系的碱性组分

• 20mM 磷酸二氢钾（KH₂PO₄） – 缓冲体系的酸性组分

• 1%（V/V）Tween-20 – 非离子型表面活性剂，降低非特异性吸附

配制方法（1L 体系）

1. 称取以下各组分，置于1L烧杯中：

• 80g NaCl

• 2g KCl

• 14.4g Na₂HPO₄（无水）或 29g Na₂HPO₄·12H₂O（十二水合物）

• 2.4g KH₂PO₄

2. 加入约 800ml 去离子水，磁力搅拌至完全溶解。

3. 加入 10ml Tween-20，继续搅拌10～15分钟至均匀分散（Tween-20粘稠，需充分混匀）。

4. 用浓盐酸或10M NaOH将溶液pH调至7.4（室温下用pH计测定）。

5. 转移至1L容量瓶，用去离子水定容至 1L，颠倒混匀数次。

6. 高温高压灭菌（121℃，20min），冷却后室温密封保存。

7. 使用时稀释10倍：取100ml 10×PBST加去离子水定容至1L，即得1×PBST工作液。

各组分功能详解

使用方法

• Western blot膜洗涤：1×PBST工作液洗涤PVDF或硝酸纤维素膜，每次5～10分钟，重复3～5次（一抗孵育后、二抗孵育后各洗涤）。

• ELISA板洗涤：每孔加入200～300μl 1×PBST，静置1～2分钟后拍干，重复3～5次。

• 稀释抗体：可用1×PBST或含1% BSA的PBST稀释一抗和二抗。

关键操作要点

• Tween-20充分混匀（最重要）：Tween-20为粘稠液体，加入后需充分搅拌至完全分散，否则溶液中Tween-20分布不均，会导致不同批次/不同区域洗涤效果不一致。

• pH精确调节（最重要）：PBST的pH直接影响抗体-抗原结合效率和洗涤效果，必须在室温下用pH计精确调至7.4，不可仅用pH试纸估算。

• 磷酸盐原料确认：Na₂HPO₄有无水（分子量142）和十二水合物（分子量358）两种形式，称量前务必确认试剂瓶标签。本配方无水用14.4g，十二水合物用29g，两者不可互换称量。

• 灭菌方式：本溶液可高温高压灭菌（121℃，20min）。灭菌后pH可能轻微变化（≤±0.1），一般不影响使用。

• 保存与稳定：灭菌后母液室温密封保存可稳定数月。若出现浑浊、絮状沉淀或颜色变化，说明已污染或变质，应废弃重新配制。

• 现用现配建议：1×PBST工作液建议现配现用，不宜长期存放（尤其室温下易滋生细菌），如需保存可于4℃存放1～2周。

10×PBST与10×TBST对比

选择建议：常规Western blot和ELISA首选PBST；若检测磷酸化蛋白或使用磷酸化特异性抗体，推荐TBST（避免磷酸酶干扰）。两者均含Tween-20去污剂，洗涤效果相当。

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