10×TBST – Tris缓冲盐溶液（含吐温）洗涤缓冲液（1L 配制）

10×TBST – Tris缓冲盐溶液（含吐温）洗涤缓冲液（1L 配制）

产品用途

10×TBST（Tris缓冲盐溶液含吐温）是Western blot、ELISA、免疫组化（IHC）等免疫学实验中最常用的洗涤缓冲液之一。Tris-HCl缓冲体系在pH7.5～8.0范围内具有稳定的缓冲能力，NaCl提供适宜的离子强度维持抗体-抗原结合的稳定性，Tween-20作为非离子型表面活性剂有效降低非特异性结合和背景信号。与PBST相比，TBST不含磷酸盐，尤其适用于磷酸化蛋白检测（避免磷酸酶干扰），是磷酸化特异性抗体Western blot的首选洗涤液。本产品为10倍浓缩液，使用时需稀释至1×工作浓度。

核心组分及终浓度（10×）

• 1M Tris碱 – 缓冲体系的碱性组分

• 0.9M 氯化钠（NaCl） – 维持离子强度

• 1%（V/V）Tween-20 – 非离子型表面活性剂

配制方法（1L 体系）

1. 称取以下各组分，置于1L烧杯中：

• 121g Tris碱

• 87.66g NaCl

2. 加入约 800ml 去离子水，磁力搅拌至完全溶解。

3. 加入 10ml Tween-20，继续搅拌10～15分钟，确保表面活性剂均匀分散。

4. 室温下用浓盐酸将溶液pH调至 7.5～8.0（建议精确保存在7.6，用pH计测定）。

5. 转移至1L容量瓶，用去离子水定容至 1L，颠倒混匀数次。

6. 高温高压灭菌（121℃，20min），冷却后室温密封保存。

7. 使用时稀释10倍：取100ml 10×TBST加去离子水定容至1L，即得1×TBST工作液。

各组分功能详解

使用方法

• Western blot膜洗涤：1×TBST工作液洗涤PVDF或硝酸纤维素膜，每次5～10分钟，重复3～5次（一抗孵育后、二抗孵育后各洗涤）。

• ELISA板洗涤：每孔加入200～300μl 1×TBST，静置1～2分钟后拍干，重复3～5次。

• 稀释抗体：可用1×TBST或含1% BSA的TBST稀释一抗和二抗。

• 封闭液配制：可用TBST配制5%脱脂牛奶或3% BSA封闭液。

关键操作要点

• Tween-20泡沫控制（重要）：Tween-20易产生泡沫，搅拌时转速不宜过快，避免大量泡沫影响定容准确性。若配制后出现少量泡沫，可静置片刻再定容或使用消泡剂。

• pH精确调节（重要）：TBST的pH直接影响抗体-抗原结合效率和洗涤效果，必须用pH计精确校准至目标值（推荐pH7.6），不可仅用pH试纸估算。

• 灭菌方式：本溶液可高温高压灭菌（121℃，20min）。灭菌后pH可能轻微变化（≤±0.1），一般不影响使用。

• 保存与稳定：灭菌后母液室温密封保存可稳定3个月。若出现浑浊、异味或絮状沉淀，说明已污染，需重新配制。

• 稀释后使用：1×TBST工作液建议现配现用，不宜长期存放，如需保存可于4℃存放1～2周。

10×TBST与10×PBST对比

选择建议：

• 检测磷酸化蛋白或使用磷酸化特异性抗体时，首选TBST（避免磷酸酶干扰，磷酸盐可能影响磷酸化抗体的结合）。

• 常规Western blot和非磷酸化蛋白检测，PBST和TBST均可，可依据实验室习惯选择。

• ELISA实验通常推荐PBST（磷酸盐缓冲体系更稳定）。

常见问题排查

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