0.5M 磷酸盐缓冲液（pH7.2）– 磷酸钠缓冲液（1L 配制）

0.5M 磷酸盐缓冲液（pH7.2）– 磷酸钠缓冲液（1L 配制）

产品用途

0.5M磷酸盐缓冲液（pH7.2）是生物化学和分子生物学实验中广泛使用的高浓度磷酸盐缓冲体系，主要应用于蛋白纯化（离子交换层析、亲和层析的平衡和洗脱缓冲液）、ELISA实验（包被液和洗涤液）、抗体稀释、酶学实验（提供稳定的pH环境）以及细胞培养相关试剂配制。磷酸盐缓冲体系具有优良的pH缓冲能力、低细胞毒性和良好的生物相容性，是实验室最基础的缓冲液之一。本产品为0.5M高浓度储备液，使用前按实验需求稀释至适宜工作浓度（通常稀释至10～100mM）。

核心组分及终浓度

• 0.5M 磷酸氢二钠（Na₂HPO₄·7H₂O）

• 85% 浓磷酸（H₃PO₄）调节pH至7.2

配制方法（1L 体系）

1. 称取 134g Na₂HPO₄·7H₂O（七水合磷酸氢二钠），置于1L烧杯中。

2. 加入约 800ml 去离子水，磁力搅拌至完全溶解。

3. 缓慢滴加 85%浓磷酸（H₃PO₄），边加边搅拌，用pH计调节pH至 7.2（室温下测定）。

4. 加去离子水定容至 1L，充分混匀。

5. 分装至适当容器，高温高压灭菌（121℃，20min）。

6. 灭菌后室温密封保存。

各组分功能详解

使用方法

• 蛋白纯化：作为离子交换层析的结合缓冲液或洗脱缓冲液的基础液，使用时稀释至10～50mM。

• ELISA包被：稀释至10～100mM（pH7.2～7.4），作为抗原或抗体包被液。

• 稀释工作液：根据实验需求，用去离子水稀释至目标浓度（如取100ml 0.5M缓冲液定容至1L，得50mM工作液）。

• pH复测：稀释后需复测pH，必要时用稀NaOH或稀磷酸微调。

关键操作要点

• 磷酸盐水合物确认（最重要）：磷酸钠盐有多种水合物形式，称量前务必确认试剂瓶标签。不同水合物的分子量差异巨大，用错将导致浓度大幅偏差：

• Na₂HPO₄（无水）：分子量142，本配方中不宜直接替换

• Na₂HPO₄·2H₂O：分子量178

• Na₂HPO₄·7H₂O：分子量268，本配方所用形式

• Na₂HPO₄·12H₂O：分子量358

• 若使用不同水合物，称样量需按分子量比例重新计算调整。

• 温度对pH的影响（重要）：磷酸盐缓冲液的pH值受温度影响较大，温度升高，pH下降。建议在实验所需温度下调节pH。若室温下调至7.2，在4℃使用时pH可能上升约0.1～0.2，在37℃使用时pH可能下降约0.1～0.2。

• 磷酸加入安全操作：85%浓磷酸具有强腐蚀性，操作时须在通风橱内进行，佩戴手套和护目镜。磷酸应缓慢滴加，避免局部过酸导致溶液过热。

• 灭菌后pH复核：高温高压灭菌可能导致pH轻微变化（≤±0.1），若对pH精度要求严格，使用前需用pH计复核，必要时用无菌稀NaOH或稀磷酸微调。

• 长期保存：灭菌后室温密封保存可稳定数月。若出现浑浊或沉淀，说明可能滋生微生物或盐析出，应废弃重配。

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