5M NaCl(氯化钠)高盐溶液是分子生物学和细胞生物学实验室中最基础、最常用的储备液之一,广泛应用于细胞培养(PBS、HBSS等生理缓冲液的配制原料)、DNA/RNA杂交实验(Southern blot、Northern blot中杂交液和洗涤液的盐离子来源)、蛋白纯化(离子交换层析的高盐洗脱液),以及感受态细胞制备等实验。本品为5M高浓度储备液,使用前按实验需求稀释至适宜工作浓度(通常为0.15M~1M)。
5M 氯化钠(NaCl,分子量58.44)
称取 292.2g NaCl,置于1L烧杯中。
加入约 800ml 去离子水,磁力搅拌至完全溶解。
加去离子水定容至 1L,充分混匀。
分装至适当容器(建议小份分装)。
高温高压灭菌(121℃,15-20分钟)。
灭菌后4℃保存或室温保存。
稀释工作液:根据实验需求,用去离子水或缓冲液稀释至目标浓度。
1M NaCl:取200ml 5M NaCl定容至1L
0.15M NaCl(生理盐水):取30ml 5M NaCl定容至1L
0.5M NaCl:取100ml 5M NaCl定容至1L
PBS配制:作为PBS等缓冲液中的NaCl来源。
DNA杂交:Southern/Northern blot中杂交液和洗涤液的盐离子组分。
蛋白纯化:作为离子交换层析的洗脱液(高盐梯度洗脱)。
灭菌方式:本溶液必须高温高压灭菌(121℃,15-20分钟),以彻底杀灭所有微生物,确保用于细胞培养等无菌实验时的安全性。NaCl性质稳定,高温灭菌不影响浓度和性质。
小份分装(重要):灭菌后应将大体积溶液适量分成小份(如100ml或250ml/瓶),避免大瓶反复开盖取用造成的污染风险,同时方便使用。NaCl溶液本身不易长菌,但频繁取用仍可能引入污染。
NaCl称量:NaCl易吸潮结块,称量后及时密封试剂瓶。若NaCl已结块,建议研磨或充分搅拌至完全溶解。
保存条件:灭菌后室温或4℃均可保存。若室温较高(>30℃)或长期保存,建议4℃存放以防长菌。若出现浑浊或沉淀,应废弃重新配制。
浓度核实:高浓度盐溶液密度大,定容时需充分混匀确保浓度均匀。若配制后发现结晶析出(尤其在低温环境下),可于37℃水浴加热复溶后使用。
| 问题现象 | 可能原因 | 解决方法 |
|---|---|---|
| 溶解后溶液浑浊 | NaCl纯度不足或含杂质 | 使用分析纯级NaCl重新配制 |
| 灭菌后出现结晶 | 溶液过饱和或温度过低 | 37℃水浴加热复溶后使用 |
| 培养基中细胞不长 | NaCl浓度有误或污染 | 重新配制,确认称量和定容准确 |
PBS缓冲液(1×) – 含NaCl的生理磷酸盐缓冲液
20×SSC / 20×SSPE – 含高浓度NaCl的核酸杂交母液
生理盐水(0.9% NaCl) – 细胞洗涤用等渗盐溶液
LB培养基 – 含NaCl的细菌基础培养基
蛋白纯化缓冲液 – 含不同浓度NaCl的纯化用缓冲液系列
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